氯离子通道在大鼠低氧高二氧化碳性PASMC中的表达及与MAPK通路的关系
目的：
1.探讨低氧高二氧化碳条件下氯离子通道CLCA2、CLC3 mRNA和蛋白表达的变化；
2.探讨低氧高二氧化碳条件下氯离子通道与MAPKs信号通路的关系。
方法：
1.酶消化法取雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)进行原代培养。
2.采用小鼠抗大鼠SMα-actin免疫荧光细胞化学法进行细胞鉴定。
3.低氧高二氧化碳模型复制：取第4至5代细胞，用无血清培养基培养24小时去血清同步化后随机分成六组，(1)正常组(N)；(2)低氧高二氧化碳组(H)；(3)DMSO组(D)；(4)U0126组(U)；(5)SB203580组(SB)；(6)Anisomycin组(A)。正常组(N)于常氧(37℃、5％CO2，21％O2，)条件下继续培养，其他组分别用U0126(10μM)、SB203580(10μ M)、Anisomycin(10μM)和DMSO在低氧高二氧化碳(37℃、PO250-60mmHg，PCO255-60 mmHg)条件下单独孵育细胞48小时之后收集细胞。
4.采用免疫印迹法检测钙激活性氯离子通道和容量激活性氯离子通道蛋白的表达，
5.采用半定量逆转录-聚合酶链反应技术检测钙激活性氯离子通道和容量激活性氯离子通道基因水平的表达。
结果：
1 CICA2的结果：
①与正常组(N)比较，低氧高二氧化碳组(H)和DMSO组(D)mRNA和蛋白表达量均上调，差异有统计学意义(P<0.01)；U0126组(U)和SB203580组(SB)mRNA和蛋白表达量均显著上调，差异有统计学意义(P<0.01)；Anisomycin组(A)组mRNA和蛋白表达量轻微上调，其中蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05)，mRNA表达量差异无统计学意义(P>0.05)。
②与低氧高二氧化碳组(H)比较，DMSO组(D)mRNA和蛋白表达量略微上调，差异无统计学意义(P>0.05)；U0126组(U)和SB203580组(SB)mRNA和蛋白表达量均上调，差异有统计学意义(P<0.01)；Anisomycin组(A)组mRNA表达量显著下降，差异有统计学意义(P<0.01)，蛋白表达量下降，差异有统计学意义(P<0.05)。
③与DMSO组(D)比较，U0126组(U)和SB203580组(SB)mRNA和蛋白表达量均上调，差异有统计学意义(P<0.01)；Anisomycin组(A)组mRNA和蛋白表达量显著下降，差异有统计学意义(P<0.01)。
④与U0126组(U)比较，SB203580组(SB)mRNA和蛋白表达量均略微下调，差异无统计学意义(P>0.05)；Anisomycin组(A)组mRNA和蛋白表达量均显著下降，差异有统计学意义(P<0.01)。
⑤与SB203580组(SB)比较，Anisomycin组(A)组mRNA和蛋白表达量均显著下降，差异有统计学意义(P<0.01)。
2.CLC3的结果：
①与正常组(N)比较，低氧高二氧化碳组(H)和DMSO组(D)mRNA和蛋白表达量均上调，差异有统计学意义(P<0.01)；U0126组(U)和Anisomycin组(A)mRNA表达量轻微上调，差异有统计学意义(P<0.01)，蛋白表达量轻微上调，差异有统计学意义(P<0.05)：SB203580组(SB)mRNA和蛋白表达量均显著上调，差异有统计学意义(P<0.01)。
②与低氧高二氧化碳组(H)比较，DMSO组(D)mRNA和蛋白表达量无差异；U0126组(U)mRNA和蛋白表达量均显著下调，差异有统计学意义(P<0.01)；SB203580组(SB)mRNA和蛋白表达量均显著上调，差异有统计学意义(P<0.01)；Anisomycin组(A)mRNA和蛋白表达量均显著下降，差异有统计学意义(P<0.01)。
③与DMSO组(D)比较，U0126组(U)和Anisomycin组(A)mRNA和蛋白表达量均显著下调，差异有统计学意义(P<0.01，其中A组蛋白含量变化P<0.05)；SB203580组(SB)组mRNA和蛋白表达量显著增加，差异有统计学意义(P<0.01)。
④与U0126组(u)比较，SB203580组(SB)mRNA和蛋白表达量均显著增加，差异有统计学意义(P<0.01)；Anisomycin组(A)组mRNA和蛋白表达量均轻微上调，差异无统计学意义(P>0.05)。
⑤与SB203580组(SB)比较，Anisomycin组(A)组mRNA和蛋白表达量均显著下降，差异有统计学意义(P<0.01)。
结论：
1、低氧高二氧化碳条件能够上调氯离子通道(CLCA2、CLC3)的表达；
2、ERK1/2通路抑制剂U0126能降低容量激活性氯离子通道的表达：
3、P38MAPK通路抑制剂SB203580能够上调容量激活性氯离子通道的表达；
4、ERK1/2通路抑制剂U0126、P38MAPK通路抑制剂SB203580能够上调钙激活性氯离子通道的表达；
5、Anisomycin能够下调氯离子通道(CLCA2、CLC3)的表达。
低氧高二氧化碳;氯离子通道;肺动脉高压;肺血管收缩;动物模型;酶消化法;免疫印迹法
温州医科大学;温州医学院
硕士
病理学与病理生理学
王万铁;金可可;汪洋
2012
中文
R543.2
66
2012-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）