血友病A基因诊断及产前诊断技术的研究
背景:血友病A(Hemophilia A，HA)是最常见的X连锁隐性遗传性出血性疾病，其最主要病因是由于凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因缺陷而导致FⅧ含量不足或活性下降，从而引起凝血功能障碍，多表现为自发性出血不止或手术、创伤后出血不止。临床上根据患者凝血因子Ⅷ促凝活性(FⅧ:C)将其分为重型、中性和轻型，比例分别为50％，10％，40％，其中重型HA中有约50％的是由于F8基因内含子22倒位突变引起的。由于内含子22倒位突变检测难度大，一直是限制HA基因诊断在临床上广泛开展的原因。本病尚无根治方法，只能以凝血因子Ⅷ相关制品替代治疗，因此，有必要开展HA的基因诊断及产前诊断，对携带者进行早期遗传学控制，防止此类患儿的出生。
目的:对来我院就诊的13个HA家系先证者进行F8基因突变分析，并对家系中女性成员进行携带者检测及高危胎儿进行产前诊断。
方法:应用IS-PCR(inverse shifting-polymerase chain reaction)对HA患者进行F8基因倒位检测，倒位检测阴性患者应用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序的方法进行突变检测，仍未见突变的患者应用多重酶联依赖探针扩增(Multiplex ligation-dependent probeamplification，MLPA)进行重复突变检测。
结果:IS-PCR检测出6例HA患者存在F8基因内含子22远端倒位突变;倒位检测阴性患者直接测序检出5例存在点突变，其中4例为未见报道的新突变，分别为:c.4875_4876insA，c.6267delG，c.994delT，IVS20-1G＞A; MLPA检测出1例患者存在exons2～22重复突变，为未见报道的新突变;1例患者未见F8基因突变。携带者检测结果显示18例女性中10例为该病携带者;5个HA家系中高危胎儿产前诊断结果显示3例为女性携带者胎儿，1例为正常女性胎儿，1例为正常男性胎儿。
结论:IS-PCR倒位检测结合直接测序及MLPA可有效的对HA患者及携带者进行基因诊断，并根据需要对家系中高危胎儿行产前诊断。
血友病A;X连锁隐性遗传性病;F8基因诊断;产前诊断;内含子22倒位;凝血因子Ⅷ;替代治疗
中南大学
硕士
遗传学
邬玲仟
2012
中文
R554.1;R714.55
70
2012-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）