松针原花青素的制备及主要生物活性研究
松针是松科植物的主要副产物之一。松针作为一种再生速度快、一年四季均可采收、分布广泛、天然蓄积量大、可持续利用的天然再生资源，国内外对其挥发性成分做了研究，但对松针中水溶性成分研究还不多，因此松针的利用率很低。浙江省松属植物资源丰富，其中分布面积较多的种类有马尾松、湿地松和黑松等。本研究利用浙江省松属植物资源，对松针原花青素的分离制备工艺以及其主要生物活性进行研究。
本课题的主要研究成果如下:
1.通过查阅文献、网上搜索、野外调查与走访等方式，掌握我省地松树资源的分布，然后进行实地采样，确定了三种松树资源:湿地松、马尾松以及黑松。然后以湿地松松针为实验材料，比较研究测定原花青素常用的硫酸-香草醛法和正丁醇-盐酸法对松针原花青素含量测定的稳定性、回收率和准确性的影响，并且对这两种方法中影响比色反应的条件因素进行了研究，最终确定了硫酸-香草醛法最佳比色条件为:浓硫酸30％，香草醛4％，反应温度30℃，反应时间15min;正丁醇-盐酸法最佳比色条件为:反应温度100℃、反应时间45 min。但考虑到硫酸-香草醛法重复性较好，而且具有操作简单、耗时较少的优点的，本课题有关原花青素含量测定均采用硫酸-香草醛法。
2.利用硫酸-香草醛法测定比较马尾松、湿地松以及黑松三种提取液中原花青素的含量，测得湿地松针中原花青素的含量最高，可以达到10.900±0.096 mg.g-1·FW，然后利用超声波辅助提取法、微波辅助提取法、溶剂提取法等方法比较提取湿地松针原花青素的效果，最后通过设计的单因素实验和正交实验确定最佳的提取工艺的条件:采用水提法提取松针原花青素，提取温度为100℃，提取时间为150min，pH值为4，料液比为1∶14(g∶ml)，在此工艺条件下，所测得的湿地松松针原花青素得率为(3.3415+0.0286)％。将水提取的松针原花青素粗品利用AB-8大孔吸附树脂进行纯化，通过研究AB-8大孔吸附树脂对原花青素的吸附、解析附特性，用硫酸-香草醛法测定原花青素含量，筛选得到最佳纯化工艺:水洗脱流速0.8 mL/min、上样体积1.5 mL、洗脱酒精浓度20％、酒精洗脱流速1.20 mL/min。
3.通过测定T-AOC和OH·、·O2-、DPPH·自由基等指标，并结合维生素C和维生素E进行对照，研究表明，松针原花青素对DPPH·自由基清除能力极显著的高于维生素C和维生素E(p＜0.01)，且在17.347μg/mL时达到IC50。松针原花青素的总抗氧化能力、对羟自由基、超氧阴离子自由基的清除能力低于维生素C(P＜0.01)，但松针原花青素抗氧化的稳定性显著高于维生素C(P＜0.01)。维生素C对松针原花青素的总抗氧化能力具有协同作用，是单独使用原花青素的16倍、单独使用维生素C的7.8倍。
4.通过观察不同剂量松针原花青素对小鼠血液、肝、脑和心组织的T-AOC、MDA含量以及GSH-PX、SOD活性的影响，探讨其对小鼠组织的抗氧化作用和对细胞活力的影响，研究表明，松针原花青素可以有效的增强小鼠组织的SOD、GSH-PX的活性，降低T-AOC、MDA的含量，而且有助于小鼠保持较强的抗氧化能力，在一定浓度内促进细胞增殖活性。
松针;原花青素;分离纯化;抗氧化活性;硫酸-香草醛法
浙江师范大学
硕士
植物学(生物技术方向)
徐丽珊
2012
中文
Q946.836;Q949.665
82
2012-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）