SREBP-lc在膳食脂肪酸调节肝细胞脂代谢中的作用
非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致，而以肝实质细胞脂肪变性和脂肪蓄积为特征的临床综合征，现已成为全球的主要公共问题之一。在肥胖和糖尿病群体中，70%以上有NAFLD，且将近15-30%的成年人有NAFLD。近年来随着生活方式的改变、能量和膳食脂肪摄入的增加，NAFLD的患病人数逐年增加。NAFLD的病因和发病机理一直争论不休，更为糟糕的是迄今为止尚未发现治疗NAFLD的特效药物。膳食、营养因素与NAFLD关系的研究备受关注。膳食因素中的膳食脂肪酸摄入不平衡、能量摄入过多、脂肪摄入过多，尤其是n-3多不饱和脂肪酸(n-3 pol-yunsaturated fatty acid，n-3PUFA)较少而饱和脂肪酸较多等是导致脂肪肝的主要危险因素。流行病学调查表明，NAFLD患者肝组织和血中PUFA含量降低，且NAFLD的患病率与n-3PUFA的摄入量呈负相关。
固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element-binding proteins，SREBPs)是调控与脂质代谢相关基因表达的关键性核转录因子，包括三种SREBP亚型，它们在脂质合成中扮演不同的角色，SREBP-1c是肝脏脂质代谢的关键调控者，几乎参与所有肝脏甘油三酯和脂肪酸合成基因的转录。有学者发现，SREBP-1c转基因小鼠脂肪酸合成明显加快，肝脏甘油三酯蓄积增多，在20周龄时可以自然地发生NASH。膳食脂肪酸摄入过多或摄入不平衡，可导致血浆中饱和脂肪酸升高，会激活肝脏的SREBP-1c，促进甘油三酯和脂肪酸合成基因的表达，从而导致肝脏甘油三酯合成增加，流出减少，使肝细胞脂肪贮积增多，且Ishii等通过动物实验发现n-3PUFA可通过抑制肝脏脂肪合成和蓄积而缓解肝脂肪变，但目前对所涉及的可能分子机制研究较少。我们推测，膳食脂肪酸可能通过调节SREBP-1c的表达与活性而影响NAFLD的发生发展。
基于上述分析，结合国内外研究进展，本研究以HepG2人肝细胞株为研究对象，首先以T0901317对HepG2细胞进行处理，并通过RT-PCR法验证T0901317处理细胞SREBP-1c高表达；然后以不同脂肪酸(加或不加T0901317)对HepG2细胞进行处理，通过CCK-8法观察不同脂肪酸对HepG2细胞活性的影响；通过肝细胞脂类总量和甘油三酯含量检测、油红染色等方法检测不同脂肪酸对HepG2细胞脂肪蓄积的影响；同时运用蛋白免疫印迹(Western blot，WB)、RT-PCR等实验方法，观察细胞脂代谢相关基因表达水平，从而探讨SREBP-1c在膳食脂肪酸调节肝细胞脂代谢中的作用。
主要研究结果和结论如下：
1.LXR配体T0901317在较低浓度时对HepG2细胞SREBP-1c表达就有上调作用，本实验观察到10μM T0901317上调HepG2细胞SREBP-1c表达的作用较强，且未观察到对HepG2细胞增殖有明显影响，结合国内外文献研究报导选定10μM为T0901317处理浓度。
2.CCK-8比色法检测细胞活力的结果显示，150μmol/L的不同脂肪酸处理HepG2细胞24 h后，1:1 PA+OA组、PA组显著抑制细胞生长(P<0.05)，而1:1 EPA+LA组、EPA组对细胞生长无明显影响。
3.油红染色结果显示，溶剂对照组见少数细胞脂肪变性，1:1 EPA+LA组、EPA组见少量脂滴聚积，1:1 PA+OA组、PA组见大量大小脂滴聚积。T0901317单独处理组与溶剂对照组比较，细胞脂肪变性情况加重，而T0901317联合各脂肪酸处理组均比脂肪酸单独处理组脂肪变细胞增多，且T0+PA+OA组、T0+PA组脂肪变细胞最多。
4.肝细胞甘油三酯含量和脂类总量检测结果显示，1:1 EPA+LA组、EPA组肝细胞内甘油三酯(TG)含量和脂类总量显著减少，1:1 PA+OA组、PA组显著增加(P<0.05)；T0901317处理细胞后，与溶剂对照组比，TG含量和脂类总量显著增加(P<0.05)；T0901317与不同脂肪酸混合作用细胞后，与T0901317组相比，T0+EPA+LA组、T0+EPA组显著减少，T0+PA+OA组、T0+PA组显著增加(P<0.05)。
5.Western blot及RT-PCR检测结果显示，T0901317处理细胞后，与溶剂对照组比，SREBP-1c、FAS表达显著上调，PPARα表达显著下调(P<0.05)；无论有无T0901317存在，EPA和LA下调SREBP-1c、FAS表达，上调PPARα表达显著(P<0.05)，而PA和OA上调SREBP-1c、FAS表达，下调PPARa表达(P<0.05)。
以上结果提示，SREBP-1c在体外肝细胞脂肪变过程中发挥重要作用，膳食脂肪酸可能通过调节SREBP-1c的表达与转录活性而影响肝细胞脂肪蓄积，从而影响NAFLD的发生发展。
非酒精性脂肪肝;固醇调节元件结合蛋白;膳食脂肪酸;肝细胞;脂代谢
第三军医大学
硕士
营养与食品卫生学
张乾勇
2012
中文
R575.5
56
2012-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）