禽流感病毒H9N2适应小鼠致肺脏CD4+T细胞Th17应答的研究
禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)是分节段负链RNA病毒，属于正粘病毒科。在自然条件下，禽流感病毒不但可以感染鸟类，还可以感染水貂，猪，马等哺乳动物。AIV禽-人传播导致对其潜在流行性的恐慌，AIV感染哺乳动物的分子机制并不完全清楚。此外，宿主应对禽流感病毒感染的免疫反应依然不完全清楚。基于此，本研究以AIV H9N2为研究对象，建立AIV H9N2的小鼠感染模型，研究了AIV H9N2致小鼠毒力增强的分子机制及宿主应对H9N2的免疫反应。具体内容如下：
1.基因组多氨基酸置换导致AIV H9N2致小鼠毒力增强
AIV H9N2感染人的发现需要更好的理解AIV种间传播的机制。本研究中，我们通过将H9N2野生株病毒(A/chicken/Hubei/01/1999)连续小鼠传代获得小鼠适应株病毒(ma01)。Ma01导致小鼠高致死率，严重的肺病理损伤及扩大的病毒组织分布。Ma01基因组具有9个氨基酸置换，分别位于5个病毒基因(PB2，PA，NA，M1和NS1)。在这些氨基酸突变中，PB2-627，PA-349，PA-605，NA-88和NA-356不存在其他H9N2临床分离株中。此外，存在于野生株病毒基因组中的小鼠microRNAmmu-mir-1940和mmu-mir-1904靶位点，在ma01株基因组中突变消失。被先前的研究所证实的决定AIV H5N1对小鼠毒力的氨基酸突变－－PB2-627(同样出现于Ma01中)正位于mmu-mir-1904靶位点。使用荧光定量PCR发现，与野生株相比小鼠感染ma01毒株诱导肺脏更高水平的细胞因子IL-1β(P<0.05)，IL-6(P<0.05)，TNF-a(P<0.05)和MIP-1a(P<0.05)表达差异。此外，使用ELISA方法分析小鼠外周血细胞因子水平，与野生株相比小鼠感染ma01毒株诱导更高水平的细胞因子IL-1β(P<0.05)，IL-6(P<0.05)，TNF-a(P<0.05)和IFN-β(P<0.01)。这些结果说明多氨基酸置换及逃逸宿主microRNA抑制作用可能导致ma01致死性小鼠感染，组织高病毒载量及过度的细胞因子释放。
2.神经氨酸酶涉及禽流感病毒感染导致的小鼠肺脏CD4+T细胞Th17反应
禽流感病毒感染导致细胞因子失调与疾病严重性相关。本研究中，基于AIV小鼠感染模型，我们发现H9N2感染诱导肺脏高水平的TGF-β1和IL-17A释放，使用流式分析发现肺脏CD4+T细胞Th17亚群数量增加，与mock对照7.87%相比，AIV感染CD4+/IL-17A细胞上调16.3%。进一步研究发现，流感病毒神经氨酸酶涉及CD4+T细胞Th17反应这一过程，通过诱导树突细胞成熟上调表面标志分子CD40，CD80，CD83和MHCⅡ。神经氨酸酶诱导树突细胞释放细胞因子TGF-β1，TNF-α和MIP-1α。通过体外树突细胞与CD4+T细胞共培养及CD4+T细胞体外诱导分化实验发现，神经氨酸酶不能直接诱导CD4+T细胞Th17分化，其效应需要树突细胞。此外，神经氨酸酶处理可以增强LPS，Poly(I：C)和HMGB1诱导树突细胞成熟效应。
神经氨酸酶;禽流感病毒H9N2;动物模型;CD4+T细胞;Th17应答
华中农业大学
博士
基础兽医学
毕丁仁
2012
中文
S855.3
93
2012-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）