ProNTs截断体与sortilin蛋白相互作用及重组p75NTR/Fc对Aβ25-35-PC12细胞毒性作用的影响
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)又称老年痴呆,是以不可逆进行性记忆减退和认知功能障碍为主要临床表现的一种神经系统变性疾病。其病理特点主要有神经元和神经突触的丢失以及由过度磷酸化tau蛋白组成的神经纤维结节以及由毒性Aβ沉积形成的淀粉样斑块。引起老年痴呆症的具体机制尚不完全清楚,但是,根据文献报道,神经生长因子前体蛋白proNGF以及Aβ(β-amyloid)参与了神经元凋亡过程。
神经生长因子(nerve growth factor,NGF)以前体形式合成,被蛋白酶切后释放碳末端的成熟肽(NGF-β)。成熟的神经生长因子(NGF-β)与Trk受体及p75NTR受体结合发挥促进细胞生存和分化的功能。研究显示,在受损神经元或退行性疾病的神经元中,proNGF不能被蛋白酶切割而与p75NTR受体和sortilin受体结合促进细胞的凋亡。在proNGF-p75NTR-sortilin作用的过程中,proNGF的pro-domain和NGF-β分别与sortilin和p75NTR结合。并且sortilin在proNGF发挥促细胞凋亡的过程中是必不可少的,即sortilin受体作为一个分子开关控制着proNGF诱导的通过受体p75NTR和sortilin介导的促细胞凋亡作用。本论文第一部分研究工作主要研究proNGF或者proBDNF的pro-domain与sortilin蛋白的相互作用,期望筛选到能够拮抗proNTs与sortilin作用的蛋白,以减少细胞死亡。但是,GST-pulldown与酵母双杂交结果显示proNGF或者proBDNF的pro-domain与sortilin蛋白没有相互作用。
在AD患者脑内,膜内淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)的异常水解产生的Aβ沉积产生淀粉样斑块。根据文献报道,p75NTR与Aβ相互作用介导神经元的凋亡。在本论文第二部分的研究工作中,我们研究了Aβ(25-35)对未分化PC12细胞的细胞毒性;并通过原核表达体系得到带有p75NTR胞外区及人IgGFc片段的融合蛋白,研究结果显示该融合蛋白与p75NTR竞争结合Aβ(25-35)以拮抗Aβ(25-35)对PC12的细胞毒作用,以及与p75NTR竞争结合NGF抑制神经轴突的生长。
ProNTs截断体;sortilin蛋白;相互作用;Aβ25-35-PC12细胞;毒性作用;阿尔茨海默病;发病机制
清华大学医学部;北京协和医学院;中国医学科学院
硕士
生物化学与分子生物学
王欣
2010
中文
R745.1;R741.02
71
2012-10-31(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)