何首乌饮对衰老大鼠睾丸组织NO和iNOS含量及c-fos蛋白表达的影响
随着医学及分子生物学的发展，延缓衰老成为国内外学者研究的热点课题之一。衰老与下丘脑-垂体-性腺轴的功能有着非常密切的相关，其中性腺起着重要调节的作用。传统医学认为肾虚是衰老的根本内因。补肾方剂何首乌饮具有补肝肾、健脾、益精血、延年益寿的功效。本研究采用D-半乳糖建立亚急性衰老雄性大鼠模型，探讨何首乌饮对衰老雄性大鼠睾丸组织NO和iNOS含量及c-fos蛋白影响，为延缓睾丸衰老提供理论依据，为研发临床抗衰老中药积累实验资料。 目的：观察何首乌饮对D-半乳糖所致亚急性衰老模型大鼠睾丸组织NO含量和iNOS活性的变化，睾丸组织c-fos表达和生精细胞凋亡的变化。 方法： 1模型建立及分组：选用清洁级8周龄雄性SD大鼠60只，体重180～220g，在河北医科大学实验动物中心购买。将大鼠随机分为：模型组(M)、正常对照组(N)、何首乌饮延缓衰老组(HT)和何首乌饮预防组(HP)，每组15只。除正常组外，均采用6％D-半乳糖溶液(300mg·kg-1·d-1，60 d)连续腹腔注射建立亚急性衰老模型。在造模的第60 d，何首乌饮延缓衰老组给予何首乌饮4.8 g/ml(1ml/100g)灌胃，模型组灌胃等量的生理盐水，何首乌饮预防组在腹腔注射D-半乳糖溶液的同时灌胃何首乌饮4.8 g/ml(1ml/100g)。 2标本处理 (1)用10％水合氯醛麻醉大鼠，在内眦眶后静脉采取，血约1.5 ml，离心取上清。放射免疫检测血清睾酮的含量，与正常组比较，睾酮含量下降显著后，认为模型建立成功。 (2)每组取3只大鼠，用4％多聚甲醛液灌注固定，取睾丸组织，常规石蜡包埋，用于免疫组织化学染色和TUNEL染色。 (3)其余大鼠断头处死迅速取出双侧睾丸放入液氮中，采用生物化学方法检测睾丸组织NO和iNOS含量，Western Blot法检测大鼠睾丸c-fos蛋白的表达情况。 结果： 1何首乌饮对睾丸组织NO和iNOS含量的影响 模型组(M组)大鼠睾丸组织NO和iNOS的含量明显升高，与正常对照组(N组)大鼠比较差异具有统计学意义(P<0.01)；何首乌饮可以抑制模型大鼠NO和iNOS含量的升高，预防组和延缓衰老组与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01)，且预防组优于延缓衰老组(P<0.05)。 2睾丸组织用TUNEL法染色 在各组大鼠睾丸组织中均有凋亡的发生。这些凋亡细胞包括精原细胞和初级精母细胞，存在于曲细精管近基底部，衰老组凋亡阳性率较正常组明显升高(P<0.01)，何首乌饮用药组凋亡阳性率显著低于模型组(P<0.01)，且预防用药组好于延缓衰老组(P<0.05)。 3睾丸组织c-fos蛋白的表达 免疫组织化学染色结果显示：阳性产物定位在睾丸间质细胞、精母细胞、精子细胞，呈棕黄色位于细胞核和细胞质内。Western Blot法半定量分析表明，模型组与正常组相比明显降低(P<0.01)；何首乌饮用药后均能提高睾丸c-fos蛋白的表达(P<0.01)。何首乌饮预防与延缓衰老组无显著性差别(P>0.05)。 结论： 1何首乌饮能够降低衰老大鼠睾丸组织NO和iNOS。 2何首乌饮能够减少生精细胞的凋亡。 3何首乌饮能够明显提高衰老大鼠睾丸c-fos蛋白的表达。
何首乌饮;细胞凋亡;睾丸衰老;蛋白表达;动物模型;免疫组织化学染色
河北医科大学
硕士
人体解剖与组织胚胎学
高福禄
2012
中文
R285.5
46
2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）