microRNA靶序列SET8基因多态性与非霍奇金淋巴瘤预后关联的研究
目的：在机体内许多的生化过程中，如DNA复制、修复、重组、转录，核染色质的动态变化起到了一个重要的作用，组蛋白共价修饰是细胞调节核染色质结构的方式之一。其修饰方式表现为磷酸化、甲基化、乙酰化等。依据修饰种类的不同，可以对染色体的结构做出不同的调整，以此来影响转录因子的结合从而调控基因的表达或者影响DNA本身的修饰。在这些不同的共价修饰调节中，因组蛋白甲基化在转录调控及基因活性中的基本作用，使它成为目前研究的热点。研究显示，在体内组蛋白H4的第20位赖氨酸可以分别被一次、二次、三次甲基化，进而发挥重要的生化作用。SET8(也被称为PR-SET7，SETD8，or KMT5A)可以编码组蛋白H4第20位的赖氨酸特异的蛋白甲基转移酶，在细胞周期中与转录沉默及有丝分裂调控相关。一些研究表明组蛋白密码的表观遗传学改变出现在癌症早期阶段并随着癌症进展而积累，目前发现其与多种癌症相关，如淋巴瘤，结直肠癌等。最近有报道SET8特异性的甲基化p53第382位的赖氨酸，从而抑制p53介导的高度敏感的靶基因的转录激活。P53基因突变与多种肿瘤的发病有关，其中包括淋巴瘤。此外，SET8与细胞周期及DNA复制有一定的关系。 MicroRNA是一类长度约18-24个核苷酸的小RNA，不编码蛋白质。目前已发现的1400多种人类miRNA形成不到1％的人类基因，可能调节超过30％的蛋白编码基因。MicroRNA具有调节胚胎发育、细胞增殖、分化、凋亡、肿瘤发生、胰岛素分泌等生物学功能。MicroRNA抑制信使RNA翻译并促进其降解。更重要的是miRNAs在许多癌症中扩增及过表达，进而在癌症早期发生过程中起到了促癌或抑癌作用。最近研究表明，MicroRNA通过绑定mRNA3’末端的互补序列可以使靶基因转录沉默。MicroRNA靶基因单核苷酸多态性(SNPs)能够调节原癌基因，肿瘤抑制基因，或者原癌基因通路，干扰或破坏MicroRNA的结合和转录后调控，从而影响基因的表达及功能。 NHL是一组淋巴细胞异常的异质性疾病，其在生物侵袭性和临床进程中表现不同。一些因素如分期、LDH水平、体能状态评分、IPI评分均可影响患者的生存。最近的分子研究表明，某些，外在的环境及遗传因素也可影响NHL的预后，然而其潜在的机制并不十分清楚。在本研究中，我们将对SET8基因3’末端与miR-502相关的单核苷酸多态性位点与NHL预后相关性进行探讨。 方法：采集2000年1月～2011年10月间就诊于河北医科大学第四医院血液内科非霍奇金淋巴瘤患者，本研究收集淋巴瘤患者254例，所有的病例都来源于石家庄及周围地区，包括男性150例，女性104例，年龄范围从14至87岁，中位年龄50岁。根据WHO分类标准确定淋巴瘤细胞类型。9个病人没有明确的免疫学类型。所收录的病人均采集相关临床信息，包括免疫分型、肿瘤大小、Ann Arbor分期、骨髓浸润、B组症状(不明原因发热、盗汗、消瘦)、淋巴瘤起源(淋巴结或者结外)、LDH水平、IPI评分、生存期。采集患者血液标本并提取DNA。采用PCR MasterMix kit仪进行PCR扩增，应用ABI PRISM Genetic Analyzer3730XL分析SET83’非翻译区SNP(rs16917496 C/T)基因型。用Kaplan-Meier法构建生存曲线，用Log-rank检验进行生存曲线的单因素分析，采用Cox风险比例回归模型进行多因素分析。应用SPSS分析软件对数据进行处理。 结果：Kaplan-Meier method及log-rank检验单因素生存分析显示，患者男女性别间的3年总生存率无明显统计学差异，T细胞型、肿瘤体积大、骨髓浸润、LDH增高、伴有B症状、侵袭性高、IPI评分增高的患者，其3年总生存期均有缩短，均有明显统计学意义。SET8 rs16917496多态位点三个基因型TT基因型、CT型及CC基因型3年生存率分别为46.0％，37.8％，56.7％，P=0.086，P=0.043，差别有统计学意义，CC基因型是预计生存期最长的患者，TT基因型、CT型患者在生存期方面没有显著差别，这些数据表明，CC基因型潜在影响着患者的生存。 应用Cox proportional hazards model对NHL预后风险因素进行多因素分析。Set8基因3’端非翻译区的miR-502结合位点(rs16917496多态位点)基因型与非霍奇淋巴瘤患者死亡风险相关。以CC基因型为比较基准，TT基因型的死亡风险是CC基因型的1.975倍，95％可信区间是(1.115-3.498)P值是0.020<0.05，有统计学意义。CT型的死亡风险是CC基因型的2.193倍，95％可信区间是(1.222-3.933)，P值是0.008<0.05，有统计学意义。提示Set8基因型可作为淋巴瘤患者预后的独立影响因子。 结论：Set8基因3’端非翻译区的miR-502结合位点(rs16917496多态位点)基因型是非霍奇淋巴瘤的一个独立的预测因子，对Set8基因3’端非翻译区的miR-502结合位点(rs16917496多态位点)基因型的分析，能够对淋巴瘤进行亚型的分类，有助于重新制定治疗方案。
非霍奇金淋巴瘤;单核苷酸多态性;靶序列;预后预测
河北医科大学
硕士
内科学
刁兰萍
2012
中文
R733.1
38
2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）