TLR4及其相关炎症因子与糖尿病肾病的相关性研究
目的：糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病的主要远期并发症，也是导致终末期肾衰竭的主要原因之一。研究发现，2型糖尿病(type2 diabetes mellitus，T2DM)患者体内单核-巨噬细胞Toll样受体4(toll-like receptor4，TLR4)的表达和活化均有升高，其下游多种炎性因子的表达较正常人也显著升高，说明T2DM及其并发症的进展与促炎状态密切相关。但T2DM进展至DN的机制尚不明确。TLR4主要表达于单核-巨噬细胞表面，是固有免疫和炎症反应重要的模式识别受体，主要通过髓样细胞分化因子88(myeloid differentiation factor，MyD88)依赖和非依赖途径，活化NF-κB转录因子，启动下游各种炎性因子的合成和分泌，导致炎症反应的发生。本研究拟测定。T2DM和DN患者外周血单核细胞TLR4的表达及其下游信号分子IL-6和IL-8的浓度变化，分析TLR4和IL-6、IL-8以及临床常规指标的关系，为探讨DN的炎症反应机制提供临床依据。 方法： 1研究对象实验分为三组：T2DM组、DN组和健康对照组。T2DM组(30例，男17例，女13例，平均年龄50.66±9.35岁)和DN组(30例，男16例，女14例，平均年龄60.43±9.46岁)为2011年3月至2011年10月在河北医科大学第二医院内分泌科和肾内科住院患者。T2DM组根据1999年世界卫生组织糖尿病诊断标准而确诊；DN组根据其蛋白尿水平或肾活检病理检查确诊；健康对照组(30例，男10例，女20例，平均年龄49.48±8.78岁)取自同期在本院体检中心查体的健康者。 2实验方法分别采集健康人及患者的静脉抗凝血2ml，流式细胞分析外周血单核细胞TLR4的表达；采集健康者及患者的静脉血2ml，将分离的血清于-80℃保存，用放射免疫分析技术检测血清IL-6和IL-8的蛋白表达水平。分析。TLR4与IL-6、IL-8以及各项肾功指标的相关关系。 3统计学方法应用SPSS13.0软件进行统计分析，所有数据以均数±标准差(x-±s)表示，两组间比较采用两独立样本比较的t检验，TLR4与多个标间的关系采用相关分析。以P<0.05为差异有统计学意义。 结果： 1临床数据：尿素氮(BUN)在健康对照组、T2DM组和DN组分别为4.95±0.94 mmol/L，5.26±1.57 mmol/L和12.28±6.16 mmol/L，T2DM组高于正常对照组(t=0.9151，P>0.05)，但无统计学意义；DN组高于T2DM组和对照组(t=6.0502，P<0.001；t=6.4403，P<0.001)差异有统计学意义。尿白蛋白排泄率(UAER)在T2DM组(18例)和DN组(26例)分别为(0.03±0.01)和(1.36±1.54)g/24h，两组之间比较(t=3.6473，p<0.001)，差异具显著性。 2 TLR4的表达：流式细胞分析显示，外周血单核细胞TLR4的表达在健康对照组、T2DM组和DN组分别为(53.00±9.71)％，(61.50±10.37)％和(67.30±7.90)％。健康对照组与T2DM组之间(t=3.2733，P<0.01)，T2DM组与DN组之间(t=2.4660，P<0.05)，健康对照组与DN组之间(t=5.5752，P<0.001)差异均有统计学意义； 3血清中IL-6的表达水平：放射免疫分析显示，健康对照组、T2DM组和DN组的血清IL-6分别为(94.67±18.24)pg/ml，(172.78±33.70)pg/ml和(190.11±31.31)pg/ml。T2DM和DN组均高于健康对照组(t=11.1624，P<0.001；t=14.4254，P<0.001)，DN组又高于T2DM组(t=2.0642，P<0.05)，差异有统计学意义。 4血清中IL-8的表达水平：放射免疫分析显示，健康对照组、T2DM组和DN组的血清IL-8分别为(0.31±0.13)ng/ml，(0.64±0.20)ng/ml，(1.00±0.51)ng/ml。T2DM和DN组均高于健康对照组(t=7.1979，P<0.001；t=7.6042，P<0.001)，DN组又高于T2DM组(t=3.5946，P<0.001)，差异有显著性。 5 TLR4的表达与临床资料的相关性：所有资料齐全的患者(DN组26例，T2DM组4例)TLR4的表达与UAER显著正相关(r=0.557，P<0.01)；DN组TLR4的表达与尿素氮(BUN)也显著正相关(r=0.546，P<0.01)。 6 TLR4的表达与IL-6、IL-8的相关性：DN组TLR4的表达与IL-6、IL-8的水平呈正相关(r=0.515，P<0.05；r=0.523，P<0.01)。 结论： 1与健康者比较，糖尿病组和糖尿病肾病组患者外周血单核细胞TLR4的表达呈逐渐升高趋势，说明糖尿病患者TLR4的表达增高与渐趋严重的促炎状态密切相关。 2与健康者比较，糖尿病组和糖尿病肾病组血清IL-6和IL-8均显著升高，提示慢性炎症与T2DM及其并发症的发生发展有密切关系，炎性因子的升高可反映T2DM的进展和DN的状态。 3糖尿病肾病组TLR4的表达与UAER和BUN均呈正相关，表明TLR4的表达升高可能是导致肾小球硬化和肾组织损伤，促使UAER和BUN升高的关键因素。 4 DN患者外周血单核细胞TLR4的表达与血清IL-6、IL-8的水平呈正相关，提示各种促炎因子的大量产生可能与TLR4的过度激活有关，单核细胞TLR4的表达增加是产生促炎因子的始动因素。
糖尿病肾病;Toll样受体4;白介素6;白介素8;炎症反应机制
河北医科大学
硕士
免疫学
尹晓琳
2012
中文
R587.2;R692
42
2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）