重度创伤患者血清中谷氨酰胺含量检测方法与临床应用研究
本科室前期工作中发现，高效液相色谱法能够成功检测出肠内制剂中谷氨酰胺(glutamine，Gln)的含量，峰面积与浓度在一定范围内呈良好的线性关系。高效液相色谱法是一种经典的氨基酸检测方法，结果稳定性好，毛细管电泳是继其之后一个新兴的氨基酸检测方法，操作简便，试剂消耗少，分析速度快。基于此，本文利用经典高效液相色谱法与毛细管电泳法分别分离谷氨酰胺，选择更具优势的毛细管电泳法检测血清中的谷氨酰胺，其操作过程简单，分离效率高，成本低，结果灵敏可靠，进而应用于临床检测。 Gln在临床疾病中的应用十分广泛，近来的研究证实，Gln在创伤阶段作为非常关键的信号分子，调节许多有关细胞防御与修复、代谢、信号转导等基因的表达，激活胞内信号转导通路，对细胞修复和免疫调节至关重要。由创伤所引发的Gln需求和相关变化，目前尚未得出结论性的数据。因此，应用现代方法对创伤状态下Gln需要的评估是当务之急。因此，本文成功利用毛细管电泳法测定创伤患者血清中的谷氨酰胺含量，结果准确可靠。 一、高效液相色谱法与毛细管电泳法测定谷氨酰胺的方法比较 目的：建立一种准确、简便、快速的方法用于测定血清及组织中谷氨酰胺的含量。 方法：两种方法均以异硫氰酸苯酯作柱前衍生剂，在254 nm紫外波长处测定谷氨酰胺的含量。高效液相色谱法以反相C18柱为固定相，以50mmol/L醋酸钠缓冲液(pH6.05)：乙腈=94:6为流动相进行洗脱。毛细管电泳法采用重力进样，进样高度25cm，进样时间15s，弹性石英毛细管内径75μm，有效分离长度55cm，分离电压15kV，以浓度20.00mmol/L，pH9.33的硼砂缓冲溶液、166.00mmol/L的十二烷基硫酸钠(SDS)和乙腈按10:10:3比例配置作为电泳缓冲液进行分离。 结果：高效液相色谱法在0.03mmol/L-2.50mmol/L内线性关系良好(r=0.997)，线性回归方程Y=72529x+4214.6。变异系数2.46％，回收率为82.16％～115.22％，计算所得谷氨酰胺的检出限为0.01mmol/L。毛细管电泳法谷氨酰胺线性范围为0.03mmol/L～2.00mmol/L，线性回归方程Y=19873X+37.82，相关系数0.996。变异系数2.37％，回收率92.29％～110.28％，计算所得谷氨酰胺的检出限为0.01mmol/L。正常人血清中Gln平均含量是0.79±0.03mmol/L。 结论：高效液相色谱法与毛细管电泳法紫外检测测定血清及组织中谷氨酰胺的含量方法准确可靠，毛细管电泳法优于高效液相色谱法，更适合谷氨酰胺的检测。 二、重度创伤患者血清中谷氨酰胺的含量变化及与C反应蛋白的关系研究 目的：利用毛细管电泳紫外检测重度创伤患者血清中谷氨酰胺含量以及观察与C反应蛋白的关系。 方法：选择18例重度创伤患者，创伤严重度评分法(ATS-ISS评分)(16～25)(创伤组)分别在术前1d及伤后7d、14d采集静脉血制备血清，同期选择我院正常健康体检人群10例为对照组，同法制备血清。用毛细管(75μm×55cm)，以硼砂(20mmol/L，pH9.33)、十二烷基硫酸钠(166.00mmol/L)和乙腈按10:10:3配置缓冲液，异硫氰酸苯酯为衍生剂，电压15kV，紫外吸收波长254nm，检测两组血清谷氨酰胺及C反应蛋白含量。 结果：谷氨酰胺浓度在0.03～2.00mmol/L范围内线性范围良好，线性回归方程Y=19873X+37.82，相关系数为0.996；变异系数为2.37％，平均回收率范围为92.29％～110.28％；最低检测限为0.01mmol/L。正常组谷氨酰胺含量0.79±0.03mmol/L，创伤组谷氨酰胺明显低于正常组，Gln与C反应蛋白呈相关关系。 结论：毛细管电泳紫外法能有效快速的分离检测重度创伤患者血清中谷氨酰胺含量，C反应蛋白的变化与谷氨酰胺有关。
毛细管电泳;高效液相色谱法;重度创伤;血清谷氨酰胺;氨基酸检测
河北医科大学
硕士
营养与食品卫生学
李增宁
2012
中文
R641;R446.112
48
2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）