SEPT4、TEKT4基因与特发性弱精子症关系的研究
背景与目的：
近几十年,全世界范围内育龄男性的精液质量都存在着下降趋势,男性不育已是全世界面临的重要问题,而男性精液质量的下降主要体现在指标精子活动力低下。精子活力是指精子的前向运动能力,它是精子穿透宫颈粘液,到达受精部位,穿透放射冠和透明带,进入卵细胞的胞浆,完成受精全过程的重要条件。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)根据精子的前向运动能力,将精子分为a、b、c、d四级,其中a级≥25％或(a+b)级＞50%为精子活力正常,而低于此标准即为弱精子症(Asthenozoospermia,AZS)。AZS是造成男性低生育力和不育的主要原因之一。据报道[1],大约24%的低生育力男性是由于AZS引起的,另外55%的低生育力男性患者合并精液异常、精子活力低下、精子形态异常。引起弱精子症的机制也很复杂,主要涉及精子能量代谢的异常、信号传导通路的异常以及精子运动结构的异常等。
由于精子的运动主要是靠精子鞭毛的摆动实现的,因此分析精子鞭毛的结构特征并探讨弱精子症的病因及其发生机制,为低生育男性提供有效合理的临床治疗策略尤为重要。精子鞭毛是精子的主要组成部分之一,主要由轴丝、外周致密纤维(outer dense fibers,ODFs)和线粒体鞘(mitochondrial sheath,MS)等组成。目前研究发现,大约有250多种精子鞭毛轴丝及其附属结构的基因参与精子运动这一生理过程,它们的突变或表达异常均可引起精子鞭毛结构和功能的紊乱,导致精子运动障碍和活力低下[2-3]。
为更深入地了解AZS的发生机制,本研究采用逆转录.多聚酶链式反应(RT-PCR)、免疫细胞化学以及Western印迹技术,探讨精子鞭毛基因SEPT4、TEKT4与特发性弱精子症发生机制的关系,从而为临床对特发性弱精子症的可行性诊断和治疗提供可靠的实验基础和理论依据。
材料与方法：
1研究对象
30份正常生育男性(年龄21-37岁)精液标本来自于2010年9月-2011年2月河南省人类精子库合格的供精志愿者,精子密度≥60×106/ml,精子活力(a+b)级≥60%;32份特发性弱精子症患者(年龄20-38岁)精液标本来自于同期郑州大学第三附属医院生殖医学中心男科门诊的患者,精子密度≥20×106/ml,精子活力(a+b)级＜50%,分别组成为正常男性组和弱精子症组。
2方法2.1 RT-PCR
采用RT-PCR方法,检测SEPT4 mRNA和TEKT4 mRNA在两组精子中的表达。
2.2 Western印迹
采用Western印迹方法,检测SEPT4蛋白和TEKT4蛋白在两组精子中的表达。
2.3免疫细胞化学
采用免疫细胞化学技术,检测SEPT4蛋自在两组精子中的定位及表达。
3统计处理
采用SPSS17.0软件进行统计学分析,数据以-x±s表示。弱精子症组和正常男性组SEPT4、TEKT4表达之间的比较采用两独立样本t-检验进行分析;检验水准α=0.05。
结果：
1两组研究对象精子中SEPT4蛋白的定位与表达
SEPT4蛋白在精子中定位于精子鞭毛的环结构,并且与正常男性组相比,特发性弱精子症患者精子中SEPT4蛋白表达量的差异具有显著意义(t=3.452,P=0.001)。
2两组研究对象精子中SEPT4 mRNA的表达
弱精子症组精子中SEPT4 mRNA表达量与正常男性组相比显著降低,差异具有显著意义(t=3.521,P=0.001)。
3两组研究对象精子中SEPT4蛋白的表达
弱精子症组精子中SEPT4蛋白的表达水平与正常男性组相比显著降低,差异具有显著意义(t=5.872,P=0.001)。
4两组研究对象精子中TEKT4 mRNA的表达
TEKT4 mRNA在弱精子症组精子中的表达量与正常男性组相比显著降低(t=4.325,P=0.001)。
5两组研究对象精子中TEKT4蛋白的表达
弱精子症组精子中TEKT4蛋白的表达水平与正常男性组相比显著降低,差异具有显著意义(t=5.939,P=0.001)。
结论：
SEPT4、TEKT4在特发性弱精子症患者精子中表达水平显著降低,可能是导致弱精子症发生的原因之一。
特发性弱精子症;免疫印迹;免疫细胞化学;男性不育;发生机制
郑州大学
硕士
临床检验诊断学
李玉山
2012
中文
R698.2
62
2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）