致敏性青霉素降解物的酶联免疫检测方法研究
目前青霉素酶解产物没有有效的检测手段，但其对人体的致敏危害更严重，因此建立一种简单、快速的青霉素降解物酶联免疫分析方法具有重要的现实意义。本论文建立了针对青霉素酶解产物的酶联免疫检测方法，可有效地对牛奶中的青霉噻唑酸进行快速地分析。
根据青霉噻唑酸及青霉素G的结构特征，设计合成青霉噻唑酸人工抗原，免疫获得的青霉噻唑酸多克隆抗血清效价高达1:240000，100μg L-1青霉噻唑酸的抑制率为52.67％。利用Proton A-Sepharose4B亲和层析柱纯化抗体后，通过对抗体包被量、酶标抗原用量、样本稀释液pH和离子强度等参数的优化，建立了一种简便、快速的直接竞争酶联免疫检测方法。此法具有较高的灵敏度，IC50为0.320±0.012μg L-1，检测限IC15为0.031±0.002μg L-1，且稳定性好，板内变异0.85～7.81％，板间变异1.33～10.10％。进一步考察了样品的基质影响及其消除方法，牛奶和奶粉经离心和稀释即可消除基质影响，无需有机溶剂或液液萃取、固相萃取等净化手段，样品加标回收率为72.75～93.25％，可满足快速筛选方法的要求。
通过高效液相色谱质谱联用，对建立的青霉噻唑酸直接竞争酶联免疫检测方法的准确性进行了验证。两种方法检测结果具有较高的相关性，线性相关系数R2值为0.9977。
研究了牛奶热处理对青霉噻唑酸ELISA方法的影响，结果表明添加降解物的牛奶经过不同热处理对检测结果没有影响，显示该方法具有良好的适用性。采用建立的ELISA方法检测了天津出入境检验检疫局的实际阳性盲样，并与其液质联用检测方法比对，结果表明二者具有高度的一致性(R2=0.9993)，充分说明青霉噻唑酸酶联免疫检测方法检测结果可靠，可用于大量样品的快速现场检测。
青霉素;降解物;青霉噻唑酸;酶联免疫
天津科技大学
硕士
营养与食品卫生学
王硕
2010
中文
TS207.5;R978.11
66
2012-09-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）