壁剪切力对移植静脉内膜增生中单核细胞募集的影响及机制探讨
内膜增生是临床上静脉移植血管旁路术后远期再狭窄最常见的病理改变。循环血液白细胞募集到血管壁，参与管壁炎性反应是内膜增生中早期发生、影响进展的重要阶段。单核细胞作为血管炎性病变中重要的介质细胞而广为关注；动脉系统内膜增生及粥样硬化病变中，血管壁剪切力对单核细胞募集作用的影响已有学者研究，但在移植静脉内膜增生中的作用尚未见报道。本研究首先建立并评估正常及低血流量小鼠静脉移植模型；并应用主要调控单核细胞募集的趋化因子受体2(CCR2)缺陷小鼠，观察内膜增生变化及单核细胞募集情况；结合兔不同壁剪切力状态下移植静脉白细胞募集情况综合分析；应用小鼠全基因组表达谱芯片筛选不同壁剪切力和CCR2缺陷影响移植静脉内膜增生的差异基因，并分析壁剪切力和单核细胞募集在其中的作用。
一、小鼠静脉移植模型的建立与评估
目的：建立并评估套管法小鼠正常及低血流量静脉移植模型，观察低壁剪切力对内膜增生的影响。
方法：应用套管法，建立小鼠同种异体下腔静脉一颈总动脉移植模型，通过结扎颈内动脉及枕动脉导致同侧移植静脉低壁剪切力状态。检测血流参数及术后28天内膜增生变化情况。
结果：套管法静脉移植术操作成功率高，重复性好；同侧颈动脉分支部分结扎可以降低移植静脉平均血流量及壁剪切力达70％左右；术后28天低血流量组移植静脉内膜厚度较正常血流量组增加30％左右。
结论：套管法小鼠静脉移植模型应用价值较高；低壁剪切力对移植静脉内膜增生有促进作用。
二、壁剪切力对小鼠移植静脉内膜增生及单核细胞募集的影响
目的：观察不同壁剪切力状态下CCR2缺陷对移植静脉内膜增生的影响，以及单核/巨噬细胞在术后7天移植静脉壁的表达变化。
方法：建立正常及低血流量小鼠静脉移植模型，观察CCR2基因敲除小鼠及其野生型对照在术后28天的内膜增生差别：序列切片，F4/80免疫组化染色检测术后7天移植静脉壁单核/巨噬细胞的表达及差别。
结果：CCR2缺陷不能降低正常壁剪切力状态下移植静脉内膜增生，但在低壁剪切力下可以降低内膜厚度达22.8％。术后7天单核/巨噬细胞在低血流量CCR2缺陷小鼠的移植静脉壁外层表达减少。
结论：CCR2在低壁剪切力，而不是正常壁剪切力状态下影响移植静脉内膜增生，并且可能是通过影响单核细胞的募集而实现的。
三、壁剪切力对兔移植静脉白细胞募集的影响目的：定量观察不同壁剪切力状态下移植静脉早期白细胞的募集情况。方法：建立兔高、低血流量静脉移植模型，自体部分血液白细胞分离、标记并回输，定量观察术后24小时标记白细胞在内皮表面及内皮下的表达。结果：术后24小时低血流量侧移植静脉内皮及内皮下白细胞表达明显高于同一实验动物高血流量侧移植静脉。结论：低壁剪切力增强，而高壁剪切力降低循环白细胞对移植静脉的募集。
四、小鼠静脉移植术后早期基因表达谱及壁剪切力和MCP1-CCR2通路对其影响
目的：检测并分析小鼠移植静脉术后7天的全基因组表达谱，及低壁剪切力和CCR2缺陷对其的影响。
方法：应用Agilent44k小鼠全基因寡核苷酸芯片，检测C57BL/6J和CCR2基因敲除小鼠的下腔静脉、C57BL/6J正常血流量和低血流量移植术后7天静脉、CCR2基因敲除小鼠低血流量移植术后7天静脉的基因表达谱，筛选差异表达基因，行数据发掘及分析；观察CCR2及其配体-单核细胞趋化蛋白(MCP)1的基因表达情况，并行定量PCR验证。
结果：CCR2及MCP-1基因在术后7天小鼠移植静脉中表达上调；CX3CR1、CCL20、CDH20等基因在低壁剪切力或CCR2缺陷移植静脉早期均差异表达；主成分分析显示低壁剪切力和CCR2缺陷引发的基因表达差异远低于移植操作引发的综合基因表达差异。
结论：壁剪切力及MCP1-CCR2通路在移植静脉内膜增生中可能发挥作用，但作用有限；对移植静脉内膜增生的防治，不宜从单一靶点或通路着手。
静脉移植;内膜增生;壁剪切力;单核细胞;血管旁路术;术后再狭窄
复旦大学
博士
外科学
王玉琦;Scott A. Berceli;C.Keith Ozaki;符伟国
2008
中文
R622.4;R619.2
117
2012-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）