木蹄层孔菌地点间木质素降解酶与SRAP标记的遗传多样性
本研究以帽儿山、长白山、凉水、本溪四个地点木蹄层孔菌为对象,采用长度测量法和菌丝体干重法比较四个地点的木蹄层孔菌在固体培养基上的生长速度和在液体培养基中生物量的变化,用比色法检测其与木质素降解相关的酶活性,对比各地点木蹄层孔菌的生长和生理特性。同时,利用相关序列扩增多态性(SRAP)检测,分析木蹄层孔菌地点间的遗传多样性,为后续对木腐菌和木质素酶的进一步研究和合理有效利用奠定了基础。研究结果表明:
1.四个地点木蹄层孔菌生长特性比较
在PDA固体培养基中,四个地点菌株在同一温度下长势均匀,长速基本一致。四个地点的菌株在23℃下平均生长速度为0.9cm/d,在28℃下平均生长速度为0.64cm/d。木蹄层孔菌在23℃下生长速度均较28℃培养时快,说明木蹄层孔菌的生长对温度较敏感。在同一培养温度下,不同地点的木蹄层孔菌生长速度无显著差异;同一地点的木蹄层孔菌在不同温度下的生长速度却有着显著的差异。在23℃下PDA液体培养基中,四个地点的木蹄层孔菌生长速度具有一致性,不同地点的木蹄层孔菌生长量无显著差异。
2.木质素降解酶活性的比较
比较四个地点木蹄层孔菌的漆酶,木质素过氧化物酶,锰过氧化物酶活性,可以看出,三种木质素酶在培养的12天内,活性均逐渐增高,培养4天,8天和12天时的酶活性差异显著;当在不同培养基上培养时,酶活性差异显著,因PDA培养基的营养较完全培养基丰富,所以三种酶在PDA培养基上的活性均远大于完全培养基。而不同地点间的同种酶活性比较时,并无显著差异,增长具有一致性。
3.SRAP标记分析木蹄层孔菌地点间遗传多样性
本实验采用长白山,凉水,本溪,帽儿山四个地点(每个地点各5个)共20个样本作为实验SRAP-PCR体系的模板,经过体系优化之后,从8个正向引物和16个反向引物组成的8×16对组合中筛选,选出10对组合进行扩增。将得到的电泳结果形成SRAP表型数据矩阵,采用POPGENE32软件分析。计算各地点间的多态位点比率,得出4个地点间的平均多态位点比率为12.74％,而地点内的多态位点比率为6.85％,地点之间的多态位点比率较地点内高,存在较大的遗传变异。通过Nei指数和Shannon指数两种表型多样性指数所估算的各地点木蹄层孔菌的遗传变异结果是基本一致的,都表明长白山多样性指数最低,本溪的多样性指数最高。分别对四个地区木蹄层孔菌木质素酶活性和遗传关系进行聚类分析,结果并不完全一致,但具有一定的相关性。
木蹄层孔菌;生物学特性;木质素酶;比色法
东北林业大学
硕士
遗传学
王秋玉
2010
中文
Q943
54
2012-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）