茶黄素制备与纯化条件的初步研究
本文研究一条以成本较低且多酚含量较高的绿茶粉为原料，利用生物酶法制备TFs并采用大孔吸附脂树脂法纯化TFs的工艺。工艺流程主要分为多酚氧化酶(PPO)酶源物质的筛选：提取梨、苹果等七种果蔬中PPO并测定其活性，选择活性高的果蔬作为酶源物质；不同金属离子对PPO活性的影响：测定不同浓度的金属离子对PPO活性的影响，选择PPO的激活剂；制备TFs的反应条件的优化选择：对TFs的合成条件做单因素试验和正交试验，选择最佳条件；纯化TFs的条件的优化选择。
⑴选择梨、苹果、马铃薯、茶鲜叶、茄子，甘薯和藕等七种不同的果蔬为酶源物质，测定其PPO活性。通过对其活性的比较，筛选活性最高者作为制备茶黄素的最佳酶源。各种酶源物质活性依次为：茄子中PPO的酶活为174U；马铃薯中PPO的酶活为101.43U；甘薯中PPO的酶活为58U；梨中PPO的酶活为37U；藕中PPO的酶活为32U；苹果中PPO的酶活为24.67U；茶鲜叶中PPO的酶活为10U。选择茄子中PPO作为最佳酶源。
⑵选择铜离子、锰离子、镁离子、钙离子、钠离子、铝离子和铁离子七种离子作为研究对象，通过在粗酶液中加入不同浓度的七种金属离子，研究七种金属离子对茄子PPO活性的影响。研究表明，浓度为3mmol/L的铜离子对PPO有显著激活作用，而钙离子、钠离子、铝离子和铁离子对PPO则有抑制作用。其中，浓度为5mmol/L的铁离子是PPO的最佳抑制剂。在此条件下PPO的活性可被抑制96.6％。
⑶通过对合成TFs的不同条件(pH值、温度、底物浓度，酶添加量和反应时间)的研究，在单因素试验和正交试验的基础上，确定合成TFs的最佳条件。结果表明，反应体系的最佳条件为：pH值为4.5，温度为25℃，底物浓度为2.5g/L，酶添加量为35ml，反应时间为40分钟。其中，pH值和底物浓度是反应体系中重要的两个因素。
⑷采用大孔吸附树脂法对在最佳条件下制备到得的TFs进行纯化，通过对不同吸附条件(树脂型号、pH值、上样速度、除杂用洗脱液浓度、洗脱液体积和洗脱液浓度)的选择，确定纯化TFs的最佳工艺条件。结果表明，纯化的最佳条件为：pH值为3，上样速度为2BV/h，除杂用洗脱液浓度为15％，洗脱液体积为3BV，洗脱液浓度为90％。pH值和上样速度是影响纯化效果的重要因素。
果蔬加工;茶黄素提取;吸附纯化;酶添加剂
南京农业大学
硕士
茶学
成浩;黎星辉
2011
中文
TS255.36;TS201.2
53
2012-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）