叶酸介导肿瘤靶向的9-硝基喜树碱胶束递药系统研究
恶性肿瘤是威胁人类健康和生命的主要疾病,目前常规的肿瘤治疗方法均有局限性,因此,研制一种能够用于靶向治疗肿瘤的给药系统,具有重要的意义。本文研究的目的在于,构建一种叶酸介导的纳米胶束给药系统,用于主动靶向肿瘤治疗方面的研究,为从制剂角度通过纳米胶束载药系统,来寻求其在肿瘤药物治疗研究方面的新途径提供实验和理论依据,也为难溶性抗肿瘤药物提供一种高效低毒的纳米给药系统。
本研究主要内容包括:制备并表征叶酸共聚物胶束载体材料,叶酸-聚乙二醇-二硬酯酰磷脂酰乙醇胺(FA-PEG-DSPE)和甲氧基-聚乙二醇-二硬酯酰磷脂酰乙醇胺(MPEG-DSPE),并对两种材料对肿瘤细胞的毒性及规避巨噬细胞吞噬的适宜比例进行考察;以9-硝基喜树碱(9-nitrocamptothecin,9-NC)作为难溶性抗肿瘤药物的模型药物,制备叶酸共聚物胶束给药系统,并进行理化性质表征;采用体外细胞学评价方法考察9-NC叶酸共聚物胶束给药体系对肿瘤细胞的生长抑制作用;大鼠体内药物动力学实验,进一步验证载体材料FA-PEG-DSPE所占比例对9-NC叶酸共聚物胶束的体内行为影响。
载体材料的制备,多以羧基和氨基在N,N'-二环己基碳二亚胺的缩合而成,HPLC检测产物纯度均大于95％。采用芘荧光探针法考察两种载体材料的临界胶束浓度(CMC),结果显示FA-PEG-DSPE和MPEG-DSPE的CMC分别为1.0×10-5M和0.97×10-5M,通过两种载体材料混合制备的叶酸共聚物胶束,耐稀释,具有良好的稳定性。载体材料毒性检测结果显示,两种载体材料对细胞的杀伤能力均较小,具有良好的生物相容性。
采用不同叶酸含量的载药胶束对肿瘤细胞生长抑制作用和规避巨噬细胞吞噬能力相结合的方法,确定FA-PEG-DSPE/MPEG-DSPE=1:100作为载体,进行9-NC共聚物胶束的研制。采用成膜水化法制备9-NC叶酸共聚物胶束。以包封率、载药量和胶束溶液药物浓度为指标,在单因素试验初选的基础上,采用星点设计-效应面优化法对胶束处方进行优化。最终确定较优处方:9-NC为0.5mg,水化介质为13mL(载体量为20mg)。胶束理化性质考察结果显示,胶束呈圆球状,大小较为均匀,平均粒径约为26.8nm。
荧光示踪法考察肿瘤细胞对叶酸共聚物胶束的定性摄取结果显示,肿瘤细胞通过胞吞等方式摄取叶酸共聚物胶束后,将荧光素从内涵体和/或溶酶体中释放到细胞质中,荧光素在释放过程中逐渐扩散至细胞核,因而靠近细胞核处荧光较细胞膜处明显,由此避免药物因存在于细胞膜内表面附近而被细胞膜P-糖蛋白(P-gp)外排至细胞外,而降低药效。
采用9-NC叶酸共聚物胶束(FA-M-9-NC)进行体外细胞学药效试验,同时采用不含叶酸的9-NC共聚物胶束M-9-NC、游离药物9-NC进行对照。结果显示,不同肿瘤细胞对不同抗肿瘤药物的敏感性有所不同,呈剂量、时间依赖关系,对于叶酸受体高表达的肿瘤细胞,叶酸共聚物胶束更能增强抗肿瘤药物对细胞的杀伤能力。
大鼠体内药物动力学实验结果显示,大鼠尾静脉注射不同叶酸含量的9-NC共聚物胶束溶液后,FA-PEG-DSPE/MPEG-DSPE=0.1:100和1:100组比10:100组体内循环时间长。说明FA-PEG-DSPE在载体材料中所占比例过高,会降低胶束制剂的血液循环时间。其中0.1:100组的AUC0～t、AUC0～∞分别是10:100组的2.3倍和1.9倍:1:100组的AUC0～t、AUC0～∞分别是10:100组的2.4倍和2.0倍,提示含叶酸载体材料所占比例高到一定程度,将对9-NC叶酸共聚物胶束在体内的行为产生不利影响。
叶酸共聚物胶束;9-硝基喜树碱;处方优化;药物动力学
复旦大学
硕士
药剂学
陆伟跃
2009
中文
R730.5
77
2011-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）