嗅鞘细胞脑出血大鼠脑内移植的运动神经功能改变和形态学研究
目的：
通过差速贴壁法培养出较高纯度的嗅鞘细胞，使之达到一定的数量供细胞移植；在大鼠尾状核注射胶原酶Ⅳ，制作脑出血模型；将培养成功的嗅鞘细胞荧光标记后，移植入脑出血模型大鼠脑内，观察大鼠脑出血后神经功能的恢复以及移植后嗅鞘细胞迁移和分化的形态学改变。
方法：
一．参照Nash[50]的差速贴壁法培养出嗅鞘细胞，在倒置相差显微镜下观察不同时期嗅鞘细胞的形态；用P75和PI免疫荧光双染的方法来鉴定嗅鞘细胞，PI用于染细胞核，发红光，P75染胞浆，发绿光；通过视野切换来计算嗅鞘细胞的纯度，先在荧光显微镜下数出阳性的嗅鞘细胞，再在相差显微镜下数出所有细胞，两者的百分比即为嗅鞘细胞的纯度。
二．使用KOPF脑立体定向仪在大鼠尾状核注射胶原酶Ⅳ，制作脑出血大鼠模型，尾状核定位：前后囟水平位，前囟向右旁开3mm,硬脑膜向下6mm:从大体解剖及神经功能两个方面来评价模型：大体标本观察血肿形态，对偏瘫大鼠进行肢体的功能评价。
三．如上述方法制作的35只脑出血大鼠模型，随机分为三组，进行嗅鞘细胞移植入脑出血大鼠脑内的实验研究。
A组：10只为单纯脑出血组，不移植神经干细胞及培养液。
B组：10只为培养液移植组，在脑出血3D后移植培养液。
C组：15只为嗅鞘细胞移植组，在脑出血3D后移植嗅鞘细胞，移植前用核荧光标记物Hoechst33342标记嗅鞘细胞细胞核（5只通过免疫荧光观察细胞在大鼠体内生长及分化情况，10只用于肢体功能评价）。
三组大鼠，每组10只，分别在移植前1H，移植后7D，14D，21D，28D进行神经功能学评分，经统计学分析，判断嗅鞘细胞在脑出血大鼠脑内移植后是否能促进偏瘫肢体功能恢复。
结果：
在培养过程中，可以观察到多种嗅鞘细胞的形态，主要有梭形细胞、三极细胞、连接成网状的细胞及少量多级细胞和扁平细胞；P75与PI免疫荧光双染有大量阳性细胞，在紫外光激发下染细胞核的PI发红光，在蓝光激发下染胞浆的P75发绿光，证明该细胞为活性良好的嗅鞘细胞，在荧光显微镜下通过视野切换计算出嗅鞘细胞的纯度达80％;胶原酶Ⅳ制作脑出血模型脑内血肿边界清楚、形态规则，肢体功能障碍明显；Hoechst标记的嗅鞘细胞移植入脑出血大鼠后可见其在脑内存活，主要分布于血肿腔周边，免疫荧光检测显示移植的嗅鞘细胞能进一步分化为未成熟神经元、成熟神经元及星形胶质细胞，在血肿腔深处可观察到在血肿深处迁移的梭型细胞；移植后第21D到第28D，嗅鞘细胞移植组大鼠的神经功能改善显著好于培养液移植组和单纯脑出血组，有统计学意义(P＜0.05)。
结论：
用差速贴壁的方法能培养出纯度达80％的嗅鞘细胞，可满足细胞移植的要求，通过P75和PI免疫荧光双染阳性证实该细胞确为嗅鞘细胞；用胶原酶
Ⅳ可制作出重复性好、稳定性佳的大鼠脑出血模型；大鼠肢体功能评价表明嗅鞘细胞脑出血大鼠脑内移植能明显改善偏瘫肢体功能的恢复；嗅鞘细胞脑出血大鼠脑内移植后能存活并进一步分化为成熟神经元及星形胶质细胞并促使未成熟神经元的生长，观察到分化细胞形成的轴突和树突，在大脑深处可见移植细胞的迁移现象。
嗅鞘细胞;脑出血;动物模型;细胞移植;神经功能;形态学改变
温州医科大学;温州医学院
硕士
外科学(神经外科)
诸葛启钏
2009
中文
R743.34;R651.12
57
2011-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）