PI3K抑制剂对HGF促人结肠癌细胞SW620的增殖和迁移行为的影响
恶性肿瘤严重危害着人类身体健康。因此，寻找治疗肿瘤的有效方法是目前研究的热点和难点。在我国，随着人们生活水平的不断提高，结直肠癌的发病率有逐年上升的趋势。目前临床上主要采用以手术为主、化疗和放疗为辅的综合治疗手段，但效果并不理想，因此，仍需探索更加有效的新疗法。细胞内信号传导通路参与调节细胞凋亡、增生、分化和代谢等一系列生理活动。研究发现肿瘤的增殖、抗凋亡、转移等生物学行为与细胞信号通路异常有关。因此，能否在这一方面寻求一条新的治疗肿瘤的出路是很有前景和挑战性的课题。
肝细胞生长因子(Hepatocyte Grouth Factor，HGF)是一种由多种细胞分泌的多肽生长因子，具有强促分裂、组织成形、诱导上皮细胞迁移、侵袭以及诱导血管生成等作用。有研究表明，在结直癌患者中与正常组相比较，血清中HGF含量显著升高，且分期越晚，HGF值越高，而其中合并肝转移的结直癌患者较之无转移的结直癌患者，HGF值更高。因此认为HGF参与了结直肠癌的生长、转移。HGF通过与其受体c-Met结合进而导致包括磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide3-kinases，PI3K)-蛋白激酶B(protein kinaseB，AKT/PKB)在内的多个信号通路引起一系列生物效应，从而发挥其生理作用的。被激活的PI3K可使AKT磷酸化，来调节管理细胞代谢、生存、凋亡、分化和增殖等一系列生理活动。有研究表明，AKT/PKB参与了多种肿瘤的发生、发展及侵袭转移。肿瘤组织中AKT/PKB活性水平高可以是其上游调节异常造成的，所以通过抑制HGF/c-Met介导的信号通路来抑制肿瘤生长、侵袭和转移目前正逐渐成为肿瘤治疗研究的新方向。我们在前期研究中发现，HGF具有促进人结肠癌细胞SW620增殖、迁移等作用，但其作用机制尚未阐明。
目前抑制HGF/c-Met介导的生物学活性方法有多种，包括：HGF的拮抗剂、RNA干扰技术等方法，关于抑制HGF下游信号传导通路PI3K/AKT后是否即可抑制HGF促进结直肠癌的增殖、侵袭作用的研究报道不多。
目的：探讨PI3K/AKT信号通路在HGF促进结肠癌SW620细胞增殖、侵袭中所起到的作用，以期为探求一条新的结直肠癌治疗途径提供理论依据。
方法：
1.用MMT法分析检测PI3K/AKT信号通路在HGF促进人结肠癌细胞SW620增殖中的作用。
2.用流式细胞术检测PI3K/AKT信号通路在HGF调节人结肠癌细胞SW620细胞周期、抗凋亡中的作用。
3.用划痕实验观察PI3K/AKT信号通路在HGF促进人结肠癌细胞SW620细胞移行中的作用。
结果：
1.LY294002对SW620增殖的影响应用MTT法结果显示，实验组加入LY294002作用48h，浓度＞20μmol/L三实验组与对照组OD值比较差异有显著性(P＜0.05)，且这三个浓度组间OD值比较差异有显著性(P＜0.05)。终浓度为10μmol/L、5μmol/LLY294002组、DMSO组与对照组之间OD值比较差异无显著性(P＞0.05)。
2.LY294002对SW620凋亡、细胞分裂周期的影响流式细胞术结果显示，随LY294002浓度下降SW620凋亡率呈下降趋势，各实验组与对照组比较差异均有有显著性差异(P＜0.05)。SW620增值指数(PI)％随LY294002浓度下降呈升高趋势，与对照组比较有显著性差异(P＜0.05);10μmol/L与对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。
3.LY294002对SW620移行的影响划痕实验结果显示，培养细胞3天，测量划痕空隙宽度，在同一天内实验组移行距离较对照组短，实验组与对照组比较差异有显著性(P＜0.5)，DMSO组与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。
结论：
1.LY294002抑制PI3K/AKT信号途径后能够抑制HGF对人结肠癌细胞SW620增殖的促进作用，且抑制作用与浓度相关。
2.LY294002抑制PI3K/AKT信号途径后能够影响SW620的细胞周期进程，并抑制HGF对人结肠癌细胞SW620抗凋亡作用。
3.较高浓度的LY294002抑制PI3K/AKT信号途径后有抑制HGF促进人结肠癌细胞SW620移行作用。
PI3K/AKT抑制剂;肝细胞生长因子;结肠癌;细胞增殖;移行迁移行为;细胞凋亡;RNA干扰
河北医科大学
硕士
外科学
李中信
2011
中文
R735.35;R979.5
47
2011-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）