大鼠肾缺血后处理对热休克蛋白表达的影响及作用
目的：观察大鼠肾脏缺血后处理热休克蛋白(HSP)70、HSP27、HSP32(HO-1)表达的变化及对肾脏缺血再灌注损伤的影响，探讨缺血后处理减轻肾脏缺血再灌注损伤的机制。
方法：健康雄性SD大鼠140只，体重250g～2809，随机分为4组，每组7个时间点，每个时间点5只(n=5)：假手术组（S组）；缺血再灌注组（I/R组）；后处理组（Ipo组）；槲皮黄酮(Quercetin)+后处理组(Q+Ipo组)。
10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉，用无损伤动脉夹夹闭双侧肾蒂，肾脏颜色变为暗红色即可确认肾脏血流阻断，造成双侧肾缺血，45min后松开动脉夹，肾脏由暗红色恢复鲜红色即可确认血流恢复，同时记录再灌注时间。夹闭和放开肾蒂时腹腔内各注射林格液20ml/kg。S组仅行开腹，游离出双侧肾脏，分离双侧肾蒂不夹闭，伤口用生理盐水纱布覆盖，暴露45min不作肾缺血处理；I/R组夹闭双侧肾蒂，缺血45min后放开动脉夹；Ipo组在夹闭双侧肾蒂45min后，再灌注10s，缺血10s，反复3次，再全面恢复血液灌注；Q+Ipo组缺血前1h腹腔注射槲皮黄酮100mg.kg-1，余同Ipo组。再灌注即刻(T0)、1h(T1)、3h(T2)、6h(T3)、12h(T4)、24h(T5)、48h(T6)分别处死大鼠取材。
荧光实时定量RT-PCR法测定各时间点肾组织HSP70mRNA、HSP27mRNA和HO-1mRNA的表达，免疫组化法测定HSP70、HSP27和HO-1蛋白的表达；再灌注6h(T3)时酶法测定血清肌酐(Cr)含量，苦味酸不除蛋白法测定血清尿素氮(BUN)含量；硫代巴比妥酸(TBA)法测定肾组织中MDA含量和黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性；TUNEL法测定肾组织中细胞的凋亡；荧光实时定量RT-PCR法测定caspase-3mRNA的表达；用酶联免疫吸附(ELISA)法检测TNF-α的表达；免疫组化法测定NF-κB的表达。
结果：HSP70mRNA和HSP70蛋白的表达：S组HSP70mRNA有微量表达，HSP70蛋白几乎无表达，其余各组均在T0时开始表达，逐渐升高，T3时达高峰，随后逐渐下降。与S组比较，其余各组各时间点HSP70mRNA和HSP70蛋白表达均明显升高(P＜0.05)；与I/R组比较，Ipo组T1时HSP70mRNA表达升高，T2～T5时HSP70mRNA和HSP70蛋白表达显著升高(P＜0.05)，T3时的峰值升高(P＜0.05)，T6时HSP70蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05)，Q+Ipo组各时间点表达差异无统计学意义(P＞0.05)；与Ipo组比较，Q+Ipo组T2～T5时HSP70mRNA和HSP70蛋白表达降低(P＜0.05)，T3时的峰值降低(P＜0.05)，T6时HSP70蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）。
HO-1mRNA和HO-1蛋白的表达：S组HO-1mRNA有微量表达，HO-1蛋白几乎无表达，其余各组均在T0时开始表达，逐渐升高，T3时达高峰，随后逐渐下降。与S组比较，其余各组各时间点HO-1mRNA和HO-1蛋白表达均明显升高(P＜0.05)；与I/R组比较，Ipo组T1时HO-1mRNA表达升高，T2～T5时HO-1mRNA和HO-1蛋白表达显著升高(P＜0.05)，T3时的峰值升高(P＜0.05)，T6时HO-1蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05)，Q+Ipo组各时间点表达差异无统计学意义（P＞0.05）；与Ipo组比较，Q+Ipo组T2～T5时HO-1mRNA和HO-1蛋白表达降低(P＜0.05)，T3时的峰值降低(P＜0.05)，T6时HO-1蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05)。
HSP27mRNA和HSP27蛋白的表达：S组HSP27mRNA有微量表达，HSP27蛋白几乎无表达，其余各组均在T0时开始表达，逐渐升高，T3时达高峰，随后逐渐下降。与S组比较，其余各组各时间点HSP27mRNA和HSP27蛋白表达均明显升高（P＜0.05）；与I/R组比较，Ipo组T2～T5时HSP27mRNA和HSP27蛋白表达显著升高(P＜0.05)，T3时的峰值升高(P＜0.05)，T6时差异无统计学意义(P＞0.05)，Q+Ipo组各时间点表达差异无统计学意义（P＞0.05）；与Ipo组比较，Q+Ipo组T2～T5时HSP27mRNA和HSP27蛋白表达降低（P＜0.05），T3时的峰值降低(P＜0.05)，T6时差异无统计学意义(P＞0.05)。
再灌注6h血清Cr和BUN浓度、caspase-3mRNA、AI及病理学结果：与S组比较，其余各组血清Cr和BUN浓度升高，caspase-3mRNA、AI升高(P＜0.05)，肾损伤明显；与I/R组比较，Ipo组血清Cr和BUN浓度降低，caspase-3mRNA、AI降低(P＜0.05)，肾损伤减轻；与Ipo组比较，Q+Ipo组血清Cr和BUN浓度升高，caspase-3mRNA、AI升高(P＜0.05)，肾损伤加重；Q+Ipo组与I/R组比较各指标无明显差异。
肾组织SOD活性、MDA含量、NF-κB表达和血浆TNF-α水平：与S组比较，其余各组肾组织SOD活性降低，MDA含量升高，肾小管上皮细胞NF-κB表达和血浆TNF-α水平升高(P＜0.05)；与I/R组比较，Ipo组肾组织SOD活性升高，MDA含量降低，肾小管上皮细胞NF-κB表达和血浆TNF-α水平降低(P＜0.05)；与Ipo组比较，Q+Ipo组肾组织SOD活性降低，MDA含量升高，肾小管上皮细胞NF-κB表达和血浆TNF-α水平升高(P＜0.05)；Q+Ipo组与I/R组比较各指标无明显差异。
结论：
1.缺血后处理上调了肾组织HSP70mRNA、HSP27mRNA、HO-1mRNA和HSP70、HSP27、HO-1蛋白的表达。
2.热休克蛋白高表达在缺血后处理减轻缺血再灌注过程中的氧化应激反应和炎症反应，减少肾小管上皮细胞凋亡，保护肾功能中起重要作用。
肾缺血后处理;热休克蛋白表达;细胞凋亡;脂质过氧化反应;炎症反应;肾功能保护
河北医科大学
硕士
麻醉学
赵砚丽
2011
中文
R699.2;R614.1
62
2011-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）