PCR-SBT法研究河北汉族人群HLA-B*15等位基因多态性
目的:人类白细胞抗原(human leukocyte antigen, HLA)系统涉及生命活动的各个水平与多个方面,是调控人类特异性免疫应答和决定疾病易感性个体差异的主要基因系统。HLA系统是迄今为止人类基因组中多态性程度最高的遗传系统。
HLA-B*15组等位基因是HLA系统中多态性程度最高的基因家族系统,所编码的分子具有多种不同的血清学特异性。传统的血清学分型方法和PCR-SSP、PCR-SSOP等中低分辨率HLA基因分型方法对于HLA-B*15的多种反应格局、B*15纯合子常发生错误判断。PCR-SBT法能够对HLA等位基因进行高分辨率(*后4位数)的分型分析,并且具有准确识别新基因的能力,是目前HLA基因分型方法中最准确、最可靠和最彻底的方法。
对于器官移植,特别是造血干细胞移植而言,供受者间HLA匹配情况直接影响移植效果。通过临床回顾性分析研究也证实HLA不同位点的高分辨错配与移植物排斥、急性GVHD的发生等相关。因此在实际临床工作中,采用高分辨率的分型方法对供受者进行HLA基因分型,无疑会为患者获得良好的移植效果提供更加可靠的保证。
大量群体遗传学研究表明,HLA等位基因的分布具有明显的种族和地域的差异。目前,国内有关中国人群HLA系统的高分辨水平基因多态性研究报道甚少,并且没有关于河北汉族人群的较大样本量精确的高分辨基因分型数据资料。
本研究的目的在于应用PCR-SBT方法,研究中国造血干细胞捐献者资料库(CMDP)河北分库中河北籍汉族人群HLA-B*15组等位基因的高分辨水平的多态性及分布特征,初步探讨河北汉族人群HLA-B*15组等位基因高分辨水平的基因频率及优势基因构成特征,从而为患者寻找最适供者,改善移植存活率提供参考资料,同时也为本地区人类学及群体遗传学等方面的研究提供参考资料。
方法:
1.制备基因组DNA:标本来自按地区随机抽取的CMDP河北分库中河北籍汉族健康无血缘关系志愿者5688名,其中所有中/低分辨分型HLA-B*15阳性样本1586例,采用TIANGEN血液基因组DNA纯化试剂盒提取DNA。
2.等位基因分型:聚合酶链反应-序列分析(PCR-SBT)基础上的DNA分型,采用PCR反应扩增HLA-B基因1-8号外显子,对PCR产物纯化后分别用2、3、4外显子引物进行双向测序。
3.数据处理:使用Sequence Analysis软件处理原始数据,生成序列文件,用ATF分型软件处理序列文件。
4.不确定结果处理:采用杂合性歧义引物分离法(Heterozygous ambiguity resolution primers,HARPS)对其中模棱两可(不确定)的分型结果进行精确分型。
5.统计学处理:通过方根法计算HLA-B*15基因频率(GF),并计算各等位基因构成比、HLA-B*15组各等位基因频率(AF),不同人群间HLA基因频率比较作x2检验,检验水准α设为0.05。
结果:
1.首次取得了河北汉族人群的HLA-B*15组基因高分辨分型多态性资料。共检出19种已知等位基因。分属8种血清学特异性。其中以B*15:01基因频率最高,为0.05488,其次为B*15:11(0.02964)、B*15:18(0.02216)、B*15:02(0.01748)。这4种等位基因累计频率构成比占B*15组等位基因的85.32%,其余15种等位基因频率累计频率构成比占14.68%。表达B62抗原的等位基因共检出9种,其中B*15:01占36.39%。
2.本研究中的94例中低分辨结果为B*15,-的样本,其高分辨结果表明有27例为纯合子,其中17例为B*15:01,15:01。其余67例为杂合子,其中52例存在表达B62抗原的基因。
3.发现一例新等位基因,被世界卫生组织HLA命名委员会正式命名为B*15:202。
结论:
1.河北籍汉族人群HLA-B*15组等位基因分布较为集中。表达B62抗原的等位基因多态性最强,共检出9种等位基因,其中B*15:01占36.39%,为河北汉族人群HLA-B*15组等位基因的优势基因。
2.本研究中的94例中低分辨结果为B*15,-的样本,其测序分型结果反映出高分辨水平等位基因分布的规律性,即纯合子主要为群体的常见型,杂合子则表现为相应优势基因的组合。
3.本研究发现了一例新等位基因,被世界卫生组织HLA命名委员会正式命名为B*15:202。
汉族人群;白细胞抗原;HLA-B*15基因;基因多态性;新等位基因;PCR-SBT;干细胞移植
河北医科大学
硕士
临床检验诊断学
何路军
2011
中文
R392.11;Q813.3
45
2011-09-28(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)