肾炎宁对IgA肾病大鼠肾脏转化生长因子β1/Smad2信号传导系统的影响
目的：通过动物实验，观察肾炎宁对IgA肾病（IgAN）大鼠的24h尿蛋白定量、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及肾脏组织中TGF-β1及其受体底物Smad2表达情况的影响，探讨该方对IgAN的治疗效果及作用机制，为中医药治疗IgAN提供实验依据，拓展IgAN的临床治疗领域。
方法：将30只健康雄性SD大鼠，体重130g±10g，适应性喂养1周后用代谢笼收集检测尿蛋白和潜血均为阴性，按体重随机分为3组，每组10只，分别为正常组(Normol Group)、模型组(Model Group)和肾炎宁(Syn Group)组。除正常组外其余各组均给予隔日口服0.1％牛血清白蛋白(BSA)酸化水6周，第7周开始每周连续3天尾静脉注射BSA缓冲液，连续6周，于第8周追加注射葡萄球菌肠毒素B(SEB)，每周1次，连续3周以复制IgAN模型，正常组大鼠口服及注射等量生理盐水。第9周开始肾炎宁组给予肾炎宁煎剂灌胃，正常组、模型组均灌服等量生理盐水，共给药8周。分别于造模前、造模后第6周末、8周末、12周末、第16周末代谢笼收集24h尿液，行24h尿蛋白定量测定。16周末处死大鼠，股动脉取血，检测血清肌酐、尿素氮含量，留取肾脏组织，在光镜观察大鼠肾小球的变化，免疫荧光观察IgA沉积情况，免疫组化及聚合酶链反应(PCR)对肾组织中TGF-β1和Smad2进行半定量分析。
结果：
1.24h尿蛋白定量实验结果显示：造模前各组大鼠24h尿蛋白定量没有统计学差异；造模第6周末，除正常组外，其余两组大鼠24h尿蛋白定量明显升高，与正常组相比均有统计学意义(P＜0.05)，但两组之间没有差别。造模第8周末，除正常组外两组大鼠24h尿蛋白较第6周末有所升高，但两组之间仍无差异；造模第12周末，肾炎宁组大鼠的24h尿蛋白定量较模型组明显减少，且有统计学差异(P＜0.05)。造模第16周末，肾炎宁组大鼠的24h尿蛋白定量较模型组明显减少，有统计学差异(P＜0.05)，与8周、12周尿蛋白量比较亦有统计学意义(P＜0.05)。
2.血Scr和BUN实验结果显示：与正常组相比，模型组大鼠血清Scr有所升高，但无明显差异(P＞0.05)，肾炎宁组大鼠血清Scr有所降低，但无明显差异(P＞0.05)，且模型组与肾炎宁组相比差异也不明显(P＞0.05)；与正常组相比，模型组与肾炎宁组大鼠血清BUN均有所升高，但无明显差异(P＞0.05)，且模型组与肾炎宁组相比差异也不明显(P＞0.05)：
3.肾脏病理学改变光镜下，正常组肾小球结构完整，肾小球系膜、基质未见明显异常改变；模型组可见肾小球系膜细胞增生、系膜基质增多，系膜区增宽；部分肾小管发生空泡变性；肾炎宁组也有不同程度病理改变，但与模型组相比病变减轻。
免疫荧光观察：正常组肾小球系膜区无免疫复合物沉积，模型组可见免疫复合物沿肾小球系膜呈颗粒状分布，肾炎宁组也有不同程度的免疫复合物沉积，但较模型组减轻。
4.对大鼠肾组织TGF-β1蛋白及其基因表达的影响免疫组化染色显示：TGF-β1在肾小球上皮细胞及系膜区呈弱阳性表达，半定量分析结果显示：与正常组相比，模型组和肾炎宁组的表达要明显加强(P＜0.05)，与模型组比较，肾炎宁组的表达要明显降低(P＜0.05)。
RT-PCR结果显示：与正常组相比，模型组和肾炎宁组表达明显升高(P＜0.05)，而与模型组比较，肾炎宁组大鼠肾组织TGF-β1表达则明显降低(P＜0.05)。
5.对大鼠肾组织Smad2蛋白及其基因表达的影响免疫组化染色显示：与正常组相比，模型组和肾炎宁组阳性增强的核占小球细胞的百分比显著增加(P＜0.05)，与模型组比较，肾炎宁组的表达明显降低(P＜0.05)。
RT-PCR结果显示：与正常组相比，模型组和肾炎宁疗组Smad2mRNA显著增加(P＜0.05)，与模型组比较，肾炎宁组的表达明显降低(P＜0.05)。
结论：
1.以“益气养阴、活血通络”为大法的肾炎宁能改善IgAN大鼠的一般状况，减少尿蛋白的排泄。
2.肾炎宁可减轻减轻肾组织病理损害，延缓IgAN的进展。
3.肾炎宁能明显降低IgAN大鼠肾组织中TGF-β1蛋白及基因的表达，提示该药可能通过降低肾组织中TGF-β1蛋白及基因的表达而达到保护肾功能的作用。
4.肾炎宁能够抑制受体活化性蛋白smad2的表达，从而抑制IgAN大鼠肾脏中TGF-β/smad信号传导通路的激活，减少大鼠肾脏ECM沉积，延缓IgAN的进程。
IgA肾病;肾炎宁;转化生长因子β1;TGF-β1;Smad2信号传导系统;中医药治疗;实验药理
河北医科大学
硕士
中西医结合临床
郭登洲
2011
中文
R692.31;R285.5
52
2011-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）