NDV对SCID鼠体内人食管癌移植瘤生长的抑制作用研究
目的：2002年，我国卫生部批准中国医药生物技术协会科技部负责组织临床实施ATV-NDV（新城疫病毒修饰自体肿瘤细胞疫苗）的临床应用研究。我国少部分省市开始了对胃癌、肠癌治疗的临床试验，观察到了较好的疗效，但对食管癌的治疗鲜有报导，因而作为ATV-NDV治疗食管癌的临床应用研究的一部分，我们课题组做了NDV（新城疫病毒）对食管癌的体内作用研究。
食管癌传统的治疗方法多为手术、放疗、化疗等，这些方法对机体产生创伤或毒副作用比较明显，患者预后较差，治疗效果不佳，5年生存率低于20％。如何延长食管癌患者术后生存期，降低并发症，提高生存质量是目前食管癌临床治疗中迫切需要解决的问题。NDV以其对肿瘤细胞的选择性杀伤作用，同时又兼具体内应用的高效性的特点，成为肿瘤生物治疗研究的热点。NDV抗肿瘤研究现已进入Ⅰ期临床阶段，但其抗肿瘤机制仍是限制其进行大规模临床应用的主要因素。本课题组通过建立荷食管癌SCID鼠移植瘤模型，初步探讨了NDV在荷食管癌SCID鼠体内环境中诱导肿瘤细胞凋亡的途径、机制。通过检测NDV治疗后荷瘤小鼠移植瘤的各项指标，及其肝脏、肾脏、心肌等器官的功能，肯定了NDV对食管癌细胞具有选择性杀伤作用并在治疗食管癌方面具有安全性、可行性。
方法：建立荷食管癌SCID鼠移植瘤模型：钴60照射后肌肉注射环磷酰胺的方法对SCID鼠做预处理，用一次性无菌注射器抽取0.1ml的食管癌细胞悬液，注入实验SCID鼠右腿内侧皮下，每只鼠设1个皮下接种点，约含5×106个食管癌对数生长期细胞。
成瘤后的SCID鼠模型进行分组：阴性对照组（生理盐水治疗）、NDV治疗组(NDV治疗)、阳性对照组（5-Fu治疗）。对各组荷瘤鼠进行治疗并观察其体重、肿瘤体积等指标。21天后处死全部鼠：称量裸瘤和脾脏质量，计算抑瘤率和脾脏指数，进行毒性评价；血液监测白细胞数、肝功能、肾功能、心肌酶等指标。评价NDV治疗对SCID鼠多个脏器功能的影响；对肿瘤组织、肝脏、胸腺、脾脏做病理切片，HE染色后观察光镜下病理变化；对NDV治疗后的SCID鼠肿瘤组织提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳实验检测细胞凋亡，初步探讨了NDV对食管癌的体内作用机制。
结果：
1.NDV组抑瘤率均为34％，阳性对照组的抑瘤率为41％。
2.治疗后脾脏质量和脾指数：NDV组和阴性对照组比较无统计学意义(p＞0.05)；NDV组脾重和脾指数均高于阳性对照组，比较有统计学意义(p＜0.05)。
3.治疗后SCID鼠血液白细胞数、肝功能、肾功能、心肌酶等指标比较：多数指标NDV组和阴性对照组无统计学意义(p＞0.05)；NDV组多数指标均低于阳性对照组，比较有统计学意义(p＜0.05)。
4.病理切片HE染色，光镜观察结果显示：阴性对照组瘤细胞个体完整，细胞较密集，死亡区域少，范围较小，单个细胞胞核整齐统一、染色清晰、核膜完整、可见核仁、细胞浆清亮、细胞质边界明显；NDV组肿瘤细胞死亡区域较多，有成片状死亡、整体形态模糊，核大小不等、固缩明显，核膜溶解、核仁消失、胞浆染色不清亮，细胞质边界不清晰，分裂相少见；阳性对照组肿瘤细胞死亡范围大，有大量成片状死亡区域，细胞形态相对完整，细胞核大小不均、核深染，部分细胞核膜完整，可见核仁、胞浆着色深且模糊、细胞质界限清晰。取各组荷瘤SCID鼠的肝脏组织、胸腺组织切片进行HE染色，未发现有明显病理区别。
5.琼脂糖凝胶电泳显示NDV组肿瘤组织中提取的DNA片段降解，表现为梯形DNA电泳条带，说明食管癌细胞凋亡。
结论：
1.超净工作台饲养SCID具备实验要求，方法简单、可行。
2.经过钴60照射、肌注环磷酰胺处理的SCID鼠抗移植排斥力下降，能够提高食管癌移植瘤成功率。
3.NDV对于食管癌移植瘤SCID鼠的治疗安全、有效、副作用少。
4.NDV在SCID鼠移植瘤部位注射有效的抑制了肿瘤生长，具有较强的杀肿瘤效果。
5.NDV可通过诱导肿瘤细胞凋亡发挥杀肿瘤作用是其抗肿瘤机制之一。
新城疫病毒;食管癌;动物模型;抗肿瘤作用;细胞凋亡;肿瘤细胞疫苗
河北医科大学
硕士
病原生物学
张进顺;刘开扬
2011
中文
R735.1;R730.51
47
2011-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）