中药抗痨胶囊与抗痨丸的质量控制研究
抗痨胶囊与抗痨丸是主要用于治疗肺结核的中成药。这两种药物的主要成分均为矮地茶、百部、穿破石、五指毛桃、白及、桑白皮，其质量控制标准均沿用部颁标准，仅用化学鉴别法来做主要成分鉴别，并未采取薄层或高效液相色谱法来做含量测定，质量标准控制较为单一。本课题拟采用HPLC法建立抗痨胶囊与抗痨丸的指纹图谱，并通过HPLC指纹图谱全面控制抗痨胶囊与抗痨丸的内在质量。
岩白菜素（Bergenin）是抗痨胶囊与抗痨丸的主药矮地茶的有效成分，属于异香豆素类化合物，具有良好的镇咳、祛痰、抗炎、护肝、抗病毒和神经保护作用，现己广泛应用于临床。本课题对抗痨胶囊与抗痨丸中有效成分岩白菜素进行含量测定，从而为抗痨胶囊与抗痨丸的质量控制提供依据。
本课题还对大鼠肠内菌对岩白菜素的转化进行了初步研究，以考察其体外代谢情况，为今后更深一步研究提供依据。
第一部分：抗痨胶囊与抗痨丸的HPLC指纹图谱分析
目的：通过建立抗痨胶囊与抗痨丸的HPLC指纹图谱，得到这两种药品得对照指纹图谱，并通过相似度系统软件与不同厂家抗痨胶囊指纹特征相比较。
方法：(1)提取条件的选择：通过比较不同提取方式、提取溶剂、提取时间等条件，选择提取成分较多，提取率较高的提取条件。(2)色谱条件的选择：通过对不同的流动相、波长、柱温等影响因素的考察，确定合适的色谱条件。(3)系统适用性试验：在确定的色谱条件下，考察指纹图谱中岩白菜素峰的理论板数和分离度。(4)方法学考察：分别进行了精密度、重复性、稳定性等方法学考察。(5)指纹图谱的建立：分别取抗痨胶囊1、抗痨丸及抗痨胶囊2样品，制各样品溶液，进行指纹图谱分析、相似度评价。
结果：(1)提取条件：采用75％甲醇超声提取40min，重复性好，提取效率高。(2)色谱条件：色谱柱为DiamonsilTMC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，柱温30℃，检测波长为275nm，流动相为甲醇-乙腈-0.5％磷酸水进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min，进样体积20μl。(3)系统适用性试验：岩白菜素色谱峰的理论板数约为8000，与其它色谱峰的分离度大于1.5。(4)方法学考察：对精密度、重复性、稳定性试验结果进行分析，各主要色谱峰相对保留时间的RSD值均小于0.2％，相对峰面积的RSD值均小于3％，符合方法学实验要求。(5)指纹图谱的建立及数据结果分析：首先得到7批抗痨胶囊1的指纹图谱及其17个共有峰，运用相似度评价系统2004A版软件计算，7批抗痨胶囊1相似度均在0.9以上，批间差异较小。4批抗痨丸相似度在0.98以上，批间差异较小。
小结：建立了抗痨胶囊1的HPLC指纹图谱分析方法，并利用相对保留值系统和相似度软件对不同厂家的抗痨胶囊指纹图谱分析结果进行了评价，本方法简便、可靠，为提高抗痨胶囊的质量控制标准提供依据。
第二部分：抗痨药物中有效成分岩白菜素的含量测定
目的：通过对抗痨胶囊1，抗痨丸及抗痨胶囊2中的岩白菜素含量进行测定，为科学评价与有效控制抗痨胶囊与抗痨丸质量提供理论依据。
方法：(1)提取条件的选择：通过考察不同提取方式、提取溶剂及提取时间等方式，选择提取结果较为稳定且提取效率较高的方法。(2)色谱条件的选择：分别对波长、流动相、柱温等影响因素进行考察，确定最佳色谱条件。(3)系统适用性试验：在确定的色谱条件下，考察岩白菜素色谱峰的理论塔板数和分离度。(4)方法学考察：绘制标准曲线并分别进行精密度、稳定性、回收率考察。(5)样品测定：在确定的色谱条件下，测定了7批抗痨胶囊1、2批抗痨胶囊2及4批抗痨丸含量。
结果：(1)样品提取方法：用75％甲醇超声提取40min，可以使各有效成分达到最大的提取效率，且提取效果较为稳定。(2)最佳的色谱条件：C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，柱温30℃，以甲醇-水(20:80)为流动相进行等度洗脱，检测波长275nm，流速1.0ml/min。(3)系统适用性试验：岩白菜素色谱峰的理论塔板数约为7000，与其他色谱峰的分离度大于1.5，分离度良好。(4)方法学考察：岩白菜素在0.007823～0.6258mg/ml的范围内，线性关系良好（r=0.9999）；日内精密度RSD为0.42％，日间精密度为1.56％，样品在24小时内稳定。抗痨胶囊与抗痨丸回收率范围均在98.4～102.2％之间。(5)样品测定：抗痨胶囊1、抗痨丸和抗痨胶囊2中岩白菜素的平均含量分别为0.56、1.72和5.99mg/g。
小结：对抗痨胶囊与抗痨丸中岩白菜素的含量进行了测定，建立了测定这两种药物中岩白菜素含量的HPLC分析方法，其方法简便易行、专属性强、检测结果准确。从而为保证抗痨胶囊及抗痨丸的质量，提供了良好的质量控制方法。
第三部分：岩白菜素在大鼠肠内菌转化的代谢研究
目的：研究岩白菜素经大鼠肠内菌体外转化后的代谢情况，并应用HPLC法进行分析，查看其体外代谢情况。
方法：(1)厌氧培养液的配制：将A液、B液与C液混合后，加蒸馏水至1L，用盐酸调pH7.5～8.0。(2)肠内菌培养液的配制：将SD大鼠肠内容物按0.5g：1.5ml的比例加入厌氧培养液，快速搅拌均匀，并用医用纱布过滤即得。(3)样品溶液的制备：将1ml岩白菜素甲醇溶液(1mg/ml)加入装有肠内菌培养液5ml的培养皿中，厌氧温孵培养8小时，乙酸乙酯萃取3次，氮气挥干，甲醇溶解，离心，取上清液即得。(4)对照品溶液的制备：按样品溶液的制备方法分别制备空白Ⅰ（药物+厌氧培养液）与空白Ⅱ（大鼠粪便+厌氧培养液+等量甲醇）。(5)数据处理分析：将样品与对照品用HPLC法分析，并对结果进行比较。
结果：通过对HPLC色谱图进行比较分析，并未找到岩白菜素的代谢产物。
小结：岩白菜素有可能不经过肠内菌代谢，其代谢情况有待于进一步深入研究。
抗痨胶囊;抗痨丸;岩白菜素;指纹图谱;含量测定;药物代谢
河北医科大学
硕士
药物分析学
张兰桐
2011
中文
R283.65;R927.2
59
2011-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）