组蛋白脱乙酰化酶抑制剂VPA对Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤血管新生的影响
目的：血管新生指在原有血管基础上形成新的血管的过程，血管生成及其调控因子与血液系统恶性疾病的发生、演变和预后密切相关，我们应用免疫组化的方法，观察组蛋白乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(Valproic acid，VPA)对于Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤的微血管密度(microvascular density,MVD)的影响，及血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF)及其受体2(vascular endothelial growth factor receptor2，VEGFR2)的影响，并探讨其可能的机制。
方法：Balb/c裸鼠，雌性，周龄4-6周，体重20g左右，行脾脏切除，行全身照射400cGY后48-72小时，皮下接种对数期生长的Kasumi-1细胞，建立移植瘤模型。在接种Kasumi-1细胞10天，肿瘤生长至约200mm3，将裸鼠分为对照组和VPA治疗组。观察肿瘤的直径变化，计算抑瘤率，取出肿瘤组织行病理切片，应用免疫组化的方法观察VEGF及其受体VEGFR2的变化。计算其微血管密度的变化。
结果：
1.Kasumi-1细胞的移植瘤模型特点
裸鼠接种Kasumi-1细胞后，第3天开始成瘤，成瘤率为100％。荷瘤裸鼠随着时间延长，肿瘤体积逐渐增大，绘制肿瘤生长曲线。经病理切片检查，裸鼠的外周血、肝脏、肺脏均未见瘤细胞转移。RT-PCR方法检测Kasumi-1细胞标志性融合基因AML1/ETO，证实其表达存在。
2.VPA对移植瘤生长的抑制作用
VPA体内用药明显抑制裸鼠Kasumi-1细胞移植瘤的生长，观测到随着用药时间延长，VPA用药组移植瘤生长速度相比对照组明显减慢，用药2周后处死小鼠，实验过程中没有裸鼠死亡，VPA组瘤体积及重量与对照组相比明显减少，具有显著的统计学差异(P＜0.05)，计算肿瘤抑制率(IR％)为57.25％。
3.VPA对Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤VEGF蛋白表达的影响
各组裸鼠移植瘤切片均可见VEGF免疫阳性染色，VEGF免疫阳性产物位于细胞浆，呈棕黄色颗粒状。VEGF蛋白定量分析结果：与对照组裸鼠比较，VPA治疗组裸鼠移植瘤VEGF蛋白的表达明显下降(P＜0.01)。
4.VPA对Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤VEGFR2蛋白表达的影响
各组裸鼠移植瘤切片均可见VEGFR2免疫阳性染色，VEGFR2免疫阳性产物位于细胞浆和部分胞核，呈棕黄色颗粒状。VEGFR2蛋白定量分析结果：与对照组裸鼠比较，VPA治疗组裸鼠移植瘤VEGFR2蛋白的表达明显下降(P＜0.01)。
5.VPA对Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤肿瘤微血管密度的影响
用CD34染色微血管内皮，阳性产物定位于血管内皮细胞胞浆。MVD分析结果：与对照组裸鼠比较，VPA治疗组裸鼠移植瘤MVD值明显减小(P＜0.01)。
结论：
1.Kasumi-1细胞皮下接种裸鼠成功的建立了移植瘤的模型，RT-PCR检测AML1-ETO融合基因存在。
2.VPA对于Kasumi-1细胞的裸鼠移植瘤的生长有抑制作用，抑瘤率是57.25％。
3.检测裸鼠移植瘤的微血管密度明显减少，血管内皮生长因子及其受体的蛋白表达明显减少，体内实验表明VPA可以抑制移植瘤生长，可能是通过抑制VEGF和其受体VEGFR2的表达发挥作用。
移植瘤;组蛋白脱乙酰化酶;抑制剂;丙戊酸钠;血管新生;微血管密度;血管内皮细胞生长因子
河北医科大学
硕士
病理学与病理生理学
张敏;郝长来
2011
中文
R979.5;R730.2
42
2011-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）