兰茵凤扬化浊解毒方对溃疡性结肠炎免疫机制的实验研究
目的：溃疡性结肠炎(UC)是一种病因尚未完全阐明的慢性炎症性肠病，主要临床表现为腹泻、粘液脓血便、腹痛和里急后重。导师据多年临床经验总结，制定协定方兰茵凤扬化浊解毒方，其临床疗效肯定，副作用少。本课题通过兰茵凤扬化浊解毒方对UC大鼠模型的干预，特别是通过观察其对T细胞亚群及细胞因子(IL-8、IL-13)的影响，深入揭示兰茵凤扬化浊解毒方治疗UC的作用机制，为中医药治疗UC提供一定的理论依据和实验基础。
方法：实验选取健康清洁级Wistar大鼠60只。将大鼠随机分为5组：空白对照组(Nomal control group)、模型组(Model group)、柳氮磺胺吡啶组(SASP)、中药大剂量组(Large soup group)、中药小剂量组(Small soup group)。除空白对照组正常喂养外，其余四组大鼠均采用2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇联合造模法诱导大鼠溃疡性结肠炎动物模型。造模后第3天分别给予兰茵凤扬化浊解毒方大剂量、小剂量和柳氮磺胺吡啶进行灌胃治疗，观察其疗效并探讨其作用机制。本实验通过三个方面研究探讨：一，观察兰茵凤扬化浊解毒方对UC大鼠一般情况、结肠组织病理形态学的影响；二，观察兰茵凤扬化浊解毒方对UC大鼠T淋巴细胞亚群的影响；三，观察兰茵凤扬化浊解毒方对UC大鼠细胞因子IL-8及IL-10的影响。
结果：
一、一般情况、肉眼及镜下观察结肠组织
1.一般情况
空白对照组大鼠粪便呈小球形、毛色润泽、喜活动、主动觅食、反应灵活。
模型组大鼠从灌肠后第2天开始出现粘液稀便，甚至血便，大鼠毛色失去光泽、脱毛、竖毛、弓背、饮食明显减少、反应迟缓，倦怠懒动。
中药大剂量组、中药小剂量组、SASP组治疗1周后大鼠排便开始成球形，脓血逐渐减少，且主动觅食、反应较灵活，毛色润泽。
2.肉眼及镜下观察
2.1体重
与空白对照组(310.33±10.29)相比，模型组(255.91±6.29)、SASP组(284.09±7.98)、中药大剂量组(295.83±10.33)、中药小剂量组(269.75±7.33)体重均减轻，有显著差异(P＜0.01)；与模型组大鼠相比，中药大剂量组、中药小剂量组、SASP组、空白对照组体重均增加，结果均有显著差异(P＜0.01)。与SASP组大鼠相比，中药大剂量组体重增加，中药小剂量组减低，均有显著差异(P＜0.01)。
2.2结肠组织损伤评分
与空白对照组(0)相比，模型组(3.75±0.34)、SASP组(2.20±0.26)、中药大剂量组(1.96±0.33)、中药小剂量组(2.42±0.21)均增高；与模型组相比，中药大剂量组、中药小剂量组、SASP组、空白对照组均减低，结果均有显著差异(P＜0.01)。与SASP组相比中药小剂量组无统计学意义(P＞0.05)；中药大剂量组减低，有统计学意义(P＜0.05)。与空白对照组大鼠相比，模型组、中药小剂量组、中药大剂量组、SASP组体重均减轻，有显著差异(P＜0.01)；与模型组大鼠相比，中药大剂量组、中药小剂量组、SASP组、空白对照组体重均增加，结果均有显著差异(P＜0.01)。与SASP组大鼠相比，中药大剂量组体重增加，中药小剂量组减低，均有显著差异(P＜0.01)。
2.3结肠病理组织观察
正常对照组大鼠结肠各层结构清晰，间质未见充血水肿，固有层可见毛细血管。模型组大鼠黏膜下层有大量炎性细胞浸润，可见充血水肿、溃疡灶及大量炎细胞为主的肉芽；中药大剂量大鼠黏膜上皮及腺管排列整齐，其基本形态与正常组织相似；中药小剂量及SASP组大鼠间质充血水肿不明显，散见少量炎性细胞。
二、T细胞亚群
CD4+:与空白对照组(2221.17±72.99)相比，模型组(2187.00±54.82)、SASP组(2163.33±40.97)、中药大剂量组(2223.83±62.55)、中药小剂量组(2181.67±48.91)均无统计学意义(P＞0.05)。
CD8+:与空白对照组(1128.50±54.72)相比，模型组(799.83±42.04)、SASP组(938.17±25.06)、中药大剂量组(1067.17±59.06)、中药小剂量组(886.00±34.99)均升高，结果均有统计学意义(P＜0.05)；与模型组相比，空白对照组、SASP组、中药大剂量组、中药小剂量组均减低，结果均有统计学意义(P＜0.05)；与SASP组相比中药小剂量组无差异(P＞0.05)；中药大剂量组有显著差异(P＜0.01)。
CD4+/CD8+:与空白对照组(1.97±0.05)相比，模型组(2.73±0.11)、SASP组（2.31±0.08）、中药大剂量组（2.08±0.7）、中药小剂量组(2.47±0.13)比值均升高，有显著差异(P＜0.01)；与模型组相比，空白对照组、SASP组、中药大剂量组、中药小剂量组比值均降低，结果均有统计学意义(P＜0.05)；与SASP组相比，中药小剂量组比值增高，中药大剂量降低，均有显著差异(P＜0.01)。
三、细胞因子
IL-8：与空白对照组相比，大剂量组结果显示(P＞0.05)，无统计学意义。
IL-10:与空白对照组(0.805±0.085)相比，模型组(0.476±0.050)、SASP组(0.585±.0071)、中药大剂量组(0.710±0.062)、中药小剂量组(0.615±0.057)均增加，有显著差异(P＜0.01)；与模型组相比，空白对照组、SASP组、中药大剂量组、中药小剂量组均降低，有显著差异(P＜0.01)；与SASP组相比中药小剂量组无统计学意义(P＞0.05)，中药大剂量组增加，有显著差异(P＜0.01)。
结论：本实验成功复制了溃疡性结肠炎模型。
兰茵凤扬化浊解毒方能明显改善UC大鼠一般情况和结肠组织形态；降低CD8+计数，升高CD4+/CD8+比值，从而改善T淋巴细胞亚群的比例失调，调节细胞免疫功能；兰茵凤扬化浊解毒方可降低促炎因子IL-8，升高抗炎因子IL-10，从而抑制炎性细胞，修复受损肠黏膜，减轻炎症、促进溃疡愈合。本实验证明兰茵凤扬化浊解毒方对UC大鼠模型有很好的治疗作用，其治疗的机理可能与中药调节免疫失衡状态并改善细胞因子比例有关。
河北医科大学
硕士
中医内科学
刘启泉
2010
中文
R574.62;R242
50
2011-02-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）