益肾通络方对膜性肾病大鼠肾脏组织中核因了-κB基质金属蛋白酶-2表达的影响
目的：原发性膜性肾病（Idiopathic Membranous Nephropathy,IMN）是常见的原发性肾小球疾病，是成人肾病综合征的常见病理类型之一，发病年龄多在40～50岁之间，其病理特征为免疫复合物沿肾小球基底膜上皮侧沉积，致使毛细血管基底膜弥漫性增厚；临床可表现为蛋白尿、大量蛋白尿、肾病综合征、甚至终末期肾功能衰竭(ESRD)。本病对激素及细胞毒类药物的疗效反应性欠佳，且此类药物大多具有较大的毒副作用。近年来大量临床及实验性研究证实，中医药在辩证论治的基础上结合患者的具体病情，在治疗膜性肾病方面取得了令人满意的疗效。著名肾病专家檀金川教授经过多年临床实践，认为本病发病机理多为肾精亏虚，瘀血阻络，在此基础上创立了益肾通络方（黄芪、党参、炒白术、仙灵脾、地龙、水蛭、莪术、当归、绞股蓝等药物组成），临床疗效显著。本研究通过给大鼠注射阳离子化牛血清白蛋白成功制备出膜性肾病模型，并选用具有降低尿蛋白作用的ACEI类降压药盐酸贝那普利为对照，旨在通过观察膜性肾病大鼠的尿蛋白、血清蛋白、血脂、肾功能以及肾脏病理形态变化，并通过免疫组化观察肾组织中核因子-κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达情况，来探讨中医药治疗原发性膜性肾病的理论依据，为临床应用及实验研究提供思路。
方法：选用健康雄性SD大鼠（清洁级）48只，体重160±20g，普通饲料适应性喂养1周后，检测尿蛋白和尿红细胞均为阴性，随机分为4组：正常组、模型组、贝那普利组、中药组，每组12只。模型组、贝那普利组、中药组预免疫一周后，第3周起每周3次尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)复制膜性肾病模型，正常组注射等计量生理盐水，连续注射3周后代谢笼中留取大鼠24小时尿液，进行24小时尿蛋白定量测定。造模成功后贝那普利组给予贝那普利10mg/kg/d灌胃，中药组予以益肾通络方煎剂5ml/d灌胃，正常组及模型组灌服等量的生理盐水，各组大鼠自由进食、饮水。连续给药4周后再次留取各组大鼠24小时尿液进行24小时尿蛋白定量测定，腹主动脉取血，全自动生化分析仪检测各组大鼠血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)，并处死大鼠，留取肾组织，光镜、免疫荧光、电镜观察大鼠肾小球基底膜及足突的变化情况，免疫组化法检测NF-κB、MMP-2在肾组织的表达情况，并用病理图像分析系统进行半定量分析。
结果：
124小时尿蛋白定量
每周3次尾静脉注射C-BSA，连续注射3周后，除正常组外，其余各组均出现大量蛋白尿，与正常组相比均有显著性差异（P＜0.05）；连续给药4周后，贝那普利组及中药组尿蛋白定量均明显降低，与模型组相比有显著性差异（P＜0.05）；与贝那普利组相比，中药组治疗效果更明显（P＜0.05）
2连续给药4周后各组生化指标检测
模型组、贝那普利组、中药组血清TP、ALB均明显降低，与正常组相比有显著性差异（P＜0.05）；与模型组相比，贝那普利组、中药组血清TP、ALB均明显升高，有显著性差异，中药组治疗效果更明显，有统计学意义（P＜0.05）；模型组、贝那普利组、中药组血清TC、TG均明显升高，与正常组相比有显著性差异（P＜0.05）；与模型组相比，贝那普利组、中药组血清TC、TG均明显降低，有显著性差异；中药组低于贝那普利组(P＜0.05)；给药4周后，各组大鼠血清BUN、Scr与治疗前比较差异性不明显，无统计学意义（P＞0.05）；
3肾组织病理形态学观察
光镜下正常组肾小球结构无明显异常，模型组肾小球体积明显增大，毛细血管壁明显增厚，肾小球周围大量炎性细胞浸润，肾间质可见少量淋巴和单核细胞浸润。电镜下可见肾小球基底膜内多数电子致密物沉积，足细胞足突弥漫融合。免疫荧光可见不同程度的IgG和C3呈细颗粒状沿肾小球毛细血管壁及部分系膜区沉积。与模型组相比，贝那普利组及中药组病理变化减轻，基底膜轻度增厚，电镜下基底膜结构基本正常，电子致密物沉积减少，足细胞足突少量融合。免疫荧光可见少量的IgG和C3呈细颗粒状沿肾小球毛细血管壁沉积。
4肾组织中NF-κB、MMP-2免疫组化结果
NF-κB在正常组肾组织的肾小管上皮细胞、肾小球足细胞有少量表达；在模型组和治疗组肾小管上皮细胞和肾小球足细胞均有表达。统计学比较，模型组肾小球内NF-κB表达较治疗组显著增强（P＜0.05）；MMP-2在正常组、模型组和治疗组肾组织中均有表达，主要表达于肾小管上皮的胞浆中，呈棕黄色颗粒状，模型组肾脏中MMP-2表达强于治疗组。模型组在肾小球内有MMP-2表达，而治疗组肾小球中表达减轻。模型组大鼠肾脏组织中MMP-2表达的细胞数量明显多于治疗组。
结论：
1以健脾益肾，化瘀通络为大法的益肾通络方可显著降低膜性肾病大鼠尿蛋白、提高血浆蛋白、改善血脂代谢。
3益肾通络方对膜性肾病大鼠的治疗作用优于盐酸贝那普利。
河北医科大学
硕士
中医内科学
檀金川
2010
中文
R692.05;R242
55
2011-02-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）