番茄microRNA Sly-mir156a和Sly-mir169c的功能鉴定
番茄是重要的蔬菜作物，其遗传改良的重要途径就是寻找并利用能够调节植物发育，包括株高、叶片数等重要园艺性状的基因和对环境适应，包括干旱、低温等非生物逆境适应的基因，microRNA就属于这类基因。
microRNA是广泛存在于真核生物中的重要的调节因子，在植物和动物中的研究发现其功能是多样的，且在生物体内有着很重要的调节功能，包括生长发育、逆境应答、激素反应和病毒诱导等众多方面。
本研究以番茄作为材料，根据前人研究从microRNA数据库中选取了番茄microRNA家族中Sly-mir156a和Sly-mir169c这两个miRNA，分别构建其超量表达载体并转入番茄中，分析它们在番茄中的功能，并借助生物信息学的手段预测它们在番茄中的靶基因，分析了预测所得靶基因在相应条件下的表达情况，期望能够获得有应用价值的microRNA信息。研究获得的主要结果如下：
1.克隆了从数据库中选取的番茄两个microRNA前体基因，并构建了相应的超量表达载体；
2.通过农杆菌介导的转基因技术，将上述构建的两个表达载体转入番茄中，获得转基因番茄植株，并通过了PCR及Southern杂交验证，证实目的基因整合到番茄基因组；
3.利用RT-PCR技术验证了目的基因的超量表达；
4.通过对Sly-mir156a转基因T1代株系的观察，得到区别于对照的相应表型，转基因植株表现出矮小、叶片变多变小、节间缩短等特征，利用real-timePCR技术分析了其不同靶基因在不同组织中的表达情况，为番茄园艺性状特别是形态建成的遗传改良提供了依据；
5.将Sly-mir169c转基因T1代株系进行干旱及盐逆境的胁迫处理，转基因株系与对照表现出不同反应，前者表现出对上述非生物逆境良好的抵抗能力。对转基因和对照植株的气孔进行了观察，发现转基因株系的气孔大小和气孔导度相比对照有显著降低，说明Sly-mir169c通过调控气孔的开关降低水分的蒸腾从而提高植物的抗旱能力。同样也利用real-timePCR技术分析了其不同靶基因在不同组织中及相关逆境下的表达情况，为Sly-mir169c在逆境下的分子调控网络研究提供了初步的证据。
华中农业大学
硕士
蔬菜学
叶志彪
2010
中文
S641.2;S603.6
55
2011-02-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）