花粉管介导hrpN<,Ecc>基因转化大白菜的研究
大白菜（BrassicacampestrisL.ssp.pekinensis）原产于中国，是我国蔬菜栽培中分布最广，种植面积最大的蔬菜作物之一。大白菜软腐病是大白菜生产中的三大主要病害之一，主要由胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜亚种（Erwiniacarotovorasubsp.carotovora）引起。由于大白菜资源中缺少抗性材料，以及对植物抗病机制认识的匾乏，软腐病抗病育种一直是蔬菜育种的重大难题。近年来植物基因工程等生物技术的进步和成熟，特别是一些抗病基因在植物抗病性改良方面的成功应用，为大白菜抗病育种提供了一条新的、更有效的途径。
Harpins是植物革兰氏阴性病原细菌分泌的一类富含甘氨酸、不含半胱氨酸、亲水和热稳定蛋白质的总称。外源施用能诱导对真菌、细菌和病毒病害的广谱抗性。本研究通过花粉管通道法和花序渗透法将胡萝卜软腐欧文氏菌的hrpNEcc基因导入大白菜，期望获得抗病转基因植株，为大白菜的抗病育种奠定理论基础。研究结果如下：
1.根据已经发表的序列设计特异性引物，从胡萝卜软腐欧文氏菌中克隆出hrpNEcc基因，经上海生工测序后登陆Genbank进行BLAST比对，结果证明与原始基因序列相似性达到93％，蛋白一致性达到98％。
2.构建了含有CaMV35组成型启动子且可转录hrpNEcc基因的植株表达载体pBBBast-hrpNEcc并将其导入农杆菌EHA105中；
3.探索了大白菜花粉管通道法的转化条件。结果表明植株的基因型和导入时间对转化率均有影响。对于导入时间而言，授粉后24h导入外源基因的转化率高于授粉后12h。对于基因型而言，A19-12品系bar基因和hrpNEcc遗传转化率均高于二牛心品系。总体而言，最佳转化方法为采用A19-12品系进行24h处理。
4.大白菜转基因植株T0代通过抗性筛选、PCR和PCRsoruthonblot验证得到6株转基因植株，其中二牛心4株，A19-122株。
东北农业大学
硕士
蔬菜学
屈淑平
2010
中文
S634.1;S603.6
60
2010-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）