番茄叶霉病菌生理小种DNA指纹图谱的构建
番茄叶霉病是危害番茄生产的一种严重病害，也是生理小种分化最激烈的病害之一。为了能够有针对性的选择使用抗源，对叶霉病菌生理小种的变化需要及时监测，因此，急需研究找出一种快速简单、不受环境因素影响的鉴定新方法。
本研究以番茄叶霉病菌8个已知生理小种和2009年采自东北三省的42个未知菌株为材料，利用SSR和AFLP分子标记技术构建8个生理小种的DNA指纹图谱，并依据分子指纹图谱信息建立聚类树状图，对8个生理小种进行聚类分析。在对42个未知菌株进行常规寄主鉴定后，再利用筛选出的特异引物扩增指纹，对比于已建立的图谱，检验图谱鉴定和常规鉴定的符合率。本研究的主要研究成果如下：
1.应用SSR分子标记技术筛选得到多态性丰富的引物3对，对8个番茄叶霉病菌供试生理小种进行研究分析，建立DNA指纹图谱。3对引物共扩增出219条带，扩增出多态性条带22条，多态性带占总带数的10.04％。每对引物得到的8个叶霉病菌生理小种的SSR指纹图谱均不同，能将8个生理小种完全区分开。AFLP技术因未能成功扩增出条带，不能用于8个生理小种指纹图谱的构建。
2.依据SSR指纹图谱反映出的信息建立聚类树状图，聚类结果显示：番茄叶霉病菌群体内存在较丰富的遗传多样性。小种1.2.4和1.3之间相似系数值最大，为0.86；2.3与其它小种之间的相似系数最小，为0.53。在Dice相似系数0.53水平上，可以将供试的8个菌株划分为2个类群。
3.对2009年采自东北三省的番茄叶霉病菌菌株进行常规寄主鉴定，结果显示供试的42个菌株分别属于生理小种1.2、1.2.3.、1.2.3.4、1.2.4、1.3、1.3.4、1.4和2.3，全部为已经鉴定存在的小种，其中以1.2.3.4为主流小种，约占调查总数的30.95％，；其次为生理小种1.2.3，约占调查总数的16.67％。试验鉴定并未发现新分化的生理小种。
4.利用3对SSR特异引物M69、M80、M91对使用鉴别寄主法鉴定的42个菌株进行扩增，得到SSR指纹，与已做出的8个生理小种指纹图谱对比后发现，引物M69和M80的小种指纹鉴定结果与常规寄主鉴定结果符合率为100％；引物M91的鉴定结果由于41号菌株的不同，与常规寄主鉴定的符合率为97.62％。本研究证明：DNA指纹图谱可以应用于番茄叶霉病菌生理小种的鉴定，是一种快速准确的新方法。
东北农业大学
硕士
蔬菜学
李景富
2010
中文
S436.412.13
60
2010-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）