提高HPV融合蛋白疫苗疗效策略研究
人乳头状瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）与全世界5.3％的癌症相关，包括子宫颈癌，部分生殖器肿瘤和头颈肿瘤等。据估计有5千万妇女携带HPV，每年大约有50万妇女患癌症。因此，需要持续的发展治疗HPV相关疾病的策略。目前虽然已有多种肿瘤疫苗进入临床验证，但许多疗效不尽如人意，其原因一方面与肿瘤微环境持续地阻碍临床免疫有关，也与肿瘤细胞中人类白细胞抗原（Humanleukocyte antigen，HLA）Ⅰ类分子和抗原提呈分子（Antigen processing machinery，APM）表达低下或缺失，造成逃逸宿主免疫豁视密切相关。本研究探讨了通过改善肿瘤微环境来提高HPV治疗性疫苗的疗效，并研究了HPV治疗性疫苗在E7阳性、HLA-Ⅰ类分子表达下调的人舌痛移植瘤中的应用。
肿瘤微环境包括增殖的肿瘤细胞，肿瘤间质，血管，浸润的炎性细胞和各种相关的组织细胞。近年来研究确定髓样抑制细胞（Myeloid derived suppressor cells，MDSCs）为肿痛诱导的免疫抑制的重要因素之一。肿瘤组织中的各种因子阻止了此类细胞的分化和成熟，导致荷瘤小鼠及患者体内积聚了大量的MDSCs，阻碍了抗肿瘤免疫反应。治疗浓度的今反式维甲酸（All-trans retinoic acid，ATRA）能够明显降低荷瘤小鼠和肿痛患者体内的MDSCs的数量，在体内和体外诱导MDSCs分化成树突状细胞和巨噬细胞。本实验室构建表达的融合蛋白疫苗mE6△/mE7/TBhsp70△在C57BL/6小鼠TC-1移植瘤模型中能够产生抗肿瘤免疫，但是这种抗肿瘤作用不足以抑制较大的TC-1肿瘤的生长。研究发现TC-1肿瘤中聚集了大量的MDSCs，ATRA能够诱导骨髓细胞的正常分化，从而提高了乳头瘤病毒治疗性疫苗的抗肿瘤免疫反应。研究表明，ATRA联合疫苗不仅减少了的MDSCs的数量，还能通过抑制MDSCs上CD80的表达来抑制其功能。此外，产生了大量CDllc+CD80+，CDllc+CD86+，CDllc+MHCⅡ+成熟树突状细胞，增加了E7特异性分泌干扰素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）的T细胞的数量及其杀伤活性。
另一个肿瘤免疫逃逸的重要机制是募集和活化的调节性T细胞（Regulatory Tcell，Tregs）。这群细胞在正常情况下数量很少，但在恶性肿瘤的病人或动物体内大量扩增。研究显示在TC-1小鼠模型的脾脏和肿瘤中，聚集着大量的抑制性调节T细胞和不成熟的MDSCs。研究提出通过免疫调节剂量的环磷酰胺（Cyclophosphamide，CTX）和ATRA抑制调节T细胞和MDSCs而形成对治疗有利的肿瘤微环境，来增强HPV蛋白疫苗的疗效。正常小鼠给予CTX和ATRA共4周的观察期内，未发现体重改变，脱毛，毛色改变，活动减少或增多等毒性反应特征，说明药物剂量和用药频率是安全的。研究发现先注射CTX，然后免疫并持续14天给予ATRA能够使较大的TC-1肿瘤（>200mm3）完全消退，C57BL/6小鼠长期生存并获得记忆性免疫应答。通过优化CTX，HPV融合蛋白疫苗和ATRA的序贯联合的给药时间和给药策略，研究发现在最优时间窗内治疗可以根治TC-1肿瘤，显著的降低了脾脏中的Tregs和MDSCs，对于错过最优治疗窗的荷瘤小鼠通过增强序贯联合治疗强度可以在一定程度上提高免疫应答，伴随着Tregs和MDSCs数量的降低。研究发现不同治疗方式中肿瘤微环境中的多种抑制性因子女IL-10，IL-6，VEGF，激活的STAT3均下调，与治疗效果密切相关。ATRA加CTX也能提高肽疫苗和过继治疗的效果。本研究提示免疫调节剂量的化疗药物和疫苗序贯联合可以通过改善肿瘤微环境来抑制肿瘤生长，为HPV相关恶性肿瘤的免疫治疗提供新的思路。
HPV致痛亚型（HPV16和HPV18）是部分头颈鳞状细胞痛病因之一，尤其是口咽肿痛。其抗原加工和提呈的改变是头颈鳞状细胞肿瘤免疫逃逸重要机制。研究发现E7相关头颈部鳞状细胞中人白细胞抗原HLA-Ⅰ类分子和抗原加工提呈成分如β2-微球蛋白，低分子量蛋白，甲巯蛋白，抗原处理转运体的表达显著下降，而IFN-γ可以提高这些分子的表达。本研究发现该重组蛋白疫苗NCRT/E7/hsp可以在Hu-PBL-SCID小鼠E7阳性的舌鳞状细胞癌移植瘤中产生人IFN-γ，而不是小鼠IFN-γ。研究表明，NCRT/E7/hsp疫苗在体外能有效地提高头颈部鳞状细胞痛E7特异性的细胞毒性T淋巴细胞的产生，体内通过上调HLA-Ⅰ类分子和抗血管生成明显抑制肿瘤生长。
综上，肿瘤是多因素诱导、多基因参与、多阶段发生与演进的极其复杂的病理过程，是一种全身性疾病。传统的肿瘤治疗方法虽已经取得了较大的进展，但对中晚期及复发转移患者的预后没有显著的改善。本研究为HPV相关的恶性肿瘤的免疫治疗以及提高生存率等提供了实验数据和初步理论依据。
清华大学医学部;北京协和医学院;中国医学科学院
博士
生物化学和分子生物学
赵清正
2010
中文
R730.3
97
2010-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）