二乙烯亚胺对脊髓灰质炎病毒Sabin株灭活效果以及灭活疫苗添加佐剂的效果观察
随着全球消灭脊髓灰质炎(脊灰)目标的临近,疫苗衍生脊灰病毒(Vaccine-derived Poliovirus,VDPV)的流行、疫苗相关麻痹型病例(Vaccine Associated ParalyticPoliomyelitis,VAPP)的发生等对无脊灰状态成果的巩固威胁很大。在消灭脊灰的最后阶段,应尽快消灭脊灰野毒株,并使用脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivatedpoliovirus vaccine,IPV)替代目前广泛使用的脊髓灰质炎减毒活疫苗(Oral poliovirusvaccine,OPV)来维持无脊灰状态,消除自然界的活病毒。考虑到疫苗生产的生物安全性等因素,WHO鼓励研制Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin IPV)。
本论文旨在针对SabinⅡ型病毒,寻找一种与传统灭活剂-甲醛相比较,对病毒的抗原破坏更小,且更安全的病毒灭活剂;并进一步探索Sabin IPV中添加佐剂对免疫效果产生的影响,探讨Sabin IPV最适剂量和佐剂应用的意义。
本研究第一部分进行了二乙烯亚胺(BEI)对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株的灭活效果观察。通过在不同温度下采用4种浓度的BEI及甲醛对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株进行灭活,测定活病毒含量和D抗原含量,并进行病毒灭活验证试验。结果在37℃条件下,0.002 mol/L浓度的BEI能在48h内完全灭活病毒,灭活后的病毒液D抗原含量回收率为90.6%,显著高于甲醛灭活的回收率(60.6%)。经验证灭活彻底,无活病毒存在。BEI对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株的D抗原破坏小,能较好的保持疫苗的有效成分。
本研究的第二部分四组不同剂量的Sabin IPV疫苗与佐剂Al(OH)3配伍后免疫Wistar大鼠,通过检测各组大鼠免疫后血清中和抗体水平、特异性IFN-γ的产生情况以及免疫后各组大鼠CD3/CD4/CD8分子表达的差异,以确定使用Al(OH)3佐剂时Sabin IPV的最适剂量。通过微量中和实验检测Sabin株脊髓灰质炎特异性中和抗体发现,疫苗不同剂量产生的中和抗体GMT水平基本是抗原含量高的组高于抗原含量低的组,添加Al(OH)3佐剂组的中和抗体水平也是高于未添加佐剂组的中和抗体水平。ELISPOT测定针对Sabin株脊髓灰质炎病毒的特异性IFN-γ的结果显示,添加佐剂实验组产生的斑点要多于未添加佐剂组,2-①实验组三个型别所产生的斑点数都最多。流式细胞仪检测各组大鼠CD3/CD4/CD8分子表达差异的结果显示,1-①实验组CD3+CD4+/CD3+CD8+比值最高。综上所述,添加佐剂对三个型别的SabinIPV的免疫反应有增强的效果;综合实验结果可认为Ⅰ型采用30 DU/dose,Ⅱ型采用16 DU/dose,Ⅲ型22.5 DU/dose剂量时较为适宜。
清华大学医学部;北京协和医学院;中国医学科学院
硕士
病原生物学
李卫东
2010
中文
R373.22;R392.7
63
2010-12-31(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)