结直肠癌线粒体DNA 4977bp缺失突变和拷贝数变化的研究意义
目的:
1.检测线粒体DNA4977bp缺失突变在结直肠癌患者中的发生情况,进而研究分析线粒体DNA4977bp缺失的产生及其缺失量与结直肠癌临床病理资料之间的关系。
2.研究分析结直肠癌患者线粒体DNA拷贝数变化与临床病理资料之间的关系。
3.研究分析结直肠癌患者线粒体DNA4977bp缺失及其缺失量与线粒体DNA拷贝数之间的关系。
4.探讨线粒体DNA4977bp缺失与线粒体DNA拷贝数在结直肠癌发生发展中的作用。
方法:
1.标本的收集:随机收集了温州地区104例结直肠癌患者的石蜡切片标本,同时也收集了每位患者的临床病理资料。
2.全基因组DNA的提取:在光学显微镜下分别刮取同一石蜡切片上癌组织和癌旁正常组织,按酚-氯仿法提取组织中的基因组DNA。
3.线粒体DNA的研究:采用特定巢式PCR技术检测癌组织和癌旁正常组织中线粒体DNA4977bp缺失突变情况,然后再利用实时荧光定量PCR技术检测存在线粒体DNA4977bp缺失的患者中癌组织和癌旁正常组织中此缺失的缺失量和总线粒体DNA拷贝数的情况。
4.统计分析:通过卡方检验,两样本t检验,logistic回归分析和多元线性回归分析来探讨线粒体DNA缺失和线粒体DNA拷贝数变化与患者的临床病理资料之间的关系。
结果:
1.结直肠癌患者中线粒体DNA4977bp缺失情况:线粒体DNA4977bp缺失存在于17例患者的癌组织中和13例患者的癌旁正常组织中。其中10例患者癌组织和癌旁正常组中都有缺失。线粒体DNA4977bp缺失量位于0.011％到4.77％之间。
2.线粒体DNA4977bp缺失与结直肠癌发生发展之间的关系:线粒体DNA4977bp缺失更容易在年轻患者中的癌组织中产生(P=0.027),而在癌旁正常组织中却没有这种优势。另外,癌组织中的缺失量一般都要比癌旁正常组织中的缺失量低,还有,癌组织中的缺失量会随着病人癌症分期的升高而下降(P=0.031)。
3.结直肠癌患者中线粒体DNA拷贝数情况:在含有线粒体DNA4977bp缺失的20例患者中,几乎所有癌组织中线粒体DNA拷贝数都要比癌旁正常组织中的拷贝数高；而在没有线粒体DNA4977bp缺失的19例结直肠癌患者中却没有这种关系。同时,在有缺失的患者中,癌组织中的线粒体DNA拷贝数要比没有缺失的患者中的癌组织中线粒体DNA拷贝数高(P=0.002)。
4.线粒体DNA拷贝数与结直肠癌发生发展之间的关系:癌组织中线粒体DNA拷贝数会随着病人癌症分期的升高而增加(P=0.056),而癌旁正常组织中却没有这层关系。当我们用多元线性回归分析时,我们还发现癌组织中线粒体DNA拷贝数与病人癌症分期之间的关系更加明显(P<0.001)。
5.线粒体DNA4977bp缺失与线粒体DNA拷贝数之间的关系:随着线粒体DNA4977bp缺失量的减少,癌组织中和癌旁正常组织中线粒体DNA拷贝数都会增加,并且,在癌组织中这两者之间的关系更加明显。
结论:
1.线粒体DNA4977bp缺失更容易在年轻结直肠癌患者中产生。
2.结直肠癌患者癌组织中线粒体DNA4977bp缺失量与病人癌症分期之间是负相关的关系。这表明线粒体DNA4977bp缺失在结直肠癌早期发挥着作用。
3.结直肠癌患者癌组织中线粒体DNA拷贝数与病人癌症分期之间是正相关的关系。这表明线粒体DNA拷贝数在结直肠癌发生发展过程中发挥着作用。
4.线粒体DNA4977bp缺失对调控线粒体DNA拷贝数有作用。
5.这些结果提示了线粒体DNA4977bp缺失和线粒体DNA拷贝数的变化可能是结直肠癌诊断的分子信标之一。
线粒体DNA;4977bp缺失突变;拷贝数;结直肠癌;临床病理
温州医科大学;温州医学院
硕士
遗传学
白益东;吕建新
2010
中文
R735.37;Q343.35
67
2010-12-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）