海洋源活性功能肽的制备、纯化及性质研究
本文以富含蛋白的扇贝裙边为研究对象，研究了海洋抗氧化肽的制备方法和分离纯化工艺，对纯化的样品进行了氨基酸序列测定和功能基团的分析，并对海洋抗氧化肽进行体外活性研究，最后制备了海洋抗氧化肽的脂质体。
采用海洋碱性蛋白酶894酶解法制备抗氧化肽，研究了酶解温度、pH值、酶解时间、加酶量和时间对酶解效果的影响；在单因素实验的基础上采用L16(45)正交试验，根据Box-Behnken设计原理采用三因素三水平的响应面分析法，对酶解条件进行优化。最佳酶解条件为：固液比1:3.26，加酶量0.44％，温度31.20℃，pH9.0，酶解1h，羟自由基清除率为83.78％，与预测值的相对误差为0.29％，理论值与预测值基本一致，预测模型能较好地反映实际情况。
经过超滤、阴离子交换层析(Q Sepharose Fast Flow)、反相高效液相(KromasilC-18)和高效液相凝胶过滤层析(TSK-GEL G2000SW)，纯化了扇贝裙边酶解液中具有抗氧化性的多肽，获得两个高纯度的抗氧化活性肽SSP-1和SSP-2，并以MALDI-TOF-MS测定了其氨基酸序列。SSP-1分子量1544Da，氨基酸序列为Pro-Val-Asp-Lys-Asn-Ala-Gly-Val-Val-Gly-Ala-Pro-Pro-Lys-Arg-Gly：SSP-2分子量910Da，氨基酸序列为Arg-Gly-Gly-Arg-Gly-Ile-Thr-Asp-Tyr-Leu-Thr。将SSP-1和SSP-2与己知活性肽进行序列比对，发现这两个抗氧化活性肽均为新的活性肽。最后对两种肽的巯基、氨基、羧基及酪氨酸进行了化学修饰，发现酪氨酸是SSP-2的活性必需基团。
对SSP-1的体外活性进行了研究。SSP-1具有较强的还原能力和清除羟自由基的能力；SSP-1清除超氧阴离子的能力较高，且具有较高的抗双氧水氧化的能力，因此认为SSP-1具有较强的抗氧化活性。
最后进行了抗氧化肽脂质体的制备研究。采用薄膜-超声分散法，以包封率为指标，分别考察卵磷脂与胆固醇的质量比、温度、样品浓度、pH、转速和超声时间对脂质体的影响，在此基础上采用L9(34)正交设计进行优化。制得的纳米脂质体为单室脂质体，平均粒径为255±60nm，包封率为(58.39±0.34)％，4℃下粒径稳定性无明显变化。抗氧化肽脂质体包封率和稳定性较高，重现性好。
本研究成果为抗氧化肽进一步在功能性食品及化妆品领域中的应用奠定了一定基础，因而在经济、社会和学术研究等方面将具有重要的意义。
扇贝裙边;海洋抗氧化肽;分离纯化;氨基酸序列;脂质体;酶解法
青岛科技大学
硕士
生物化工
于建生
2010
中文
O629.72;Q814.1
77
2011-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）