高脂、炎症状态下Api6在巨噬细胞中的表达研究
目的：凋亡抑制因子6(Apoptosis Inhibitor6,Api6)也叫作AIM或Spot,是清道夫受体富含半胱氨酸残基家族新成员,在免疫反应、肿瘤发生中发挥着重要的作用；但作为清道夫受体,Api6在脂质代谢中的作用尚未得到深入研究。本研究选用人THP-1单核/巨噬细胞和小鼠RAW264.7巨噬细胞探讨①高脂、炎症状态下,两种巨噬细胞脂质蓄积情况；②高脂和/或炎症状态下,清道夫受体SR-A、CD36和Api6在两种巨噬细胞中的表达；③高脂和/或炎症状态下,核受体LXRalpha.LXRbeta表达与Api6表达的相关关系。
方法：⑴从人新鲜血浆中提取LDL,氧化制备成oxLDL；采用oxLDL刺激细胞建立高脂模型,采用脂多糖(LPS)刺激细胞建立炎症模型,油红O染色观察巨噬细胞脂质蓄积情况。⑵提取Balb/c小鼠腹腔巨噬细胞mRNA,逆转录扩增获得Api6cDNA全长,构建入pCDNA3.1质粒中,获得可以表达.Api6基因的质粒pCDNA3.1/Api6。⑶实时荧光定量PCR技术(real-time quantitative PCR)检测Api6、CD36、SR-A、LXRalpha、LXRbeta、ABCA1、ABCG1等基因在各种处理条件下,两种巨噬细胞中mRNA的表达水平。
结果：①研究发现200 ng/ml的LPS和100μg/ml的oxLDL处理可以导致体外培养的两种巨噬细胞出现异常的脂质蓄积。②成功构建了pCDNA3.1/Api6质粒,并对RAW264.7巨噬细胞进行瞬时转染,使Api6表达上调了12500倍。③高脂情况下,清道夫受体SRA在RAW264.7细胞和THP-1细胞中的表达分别上调了6倍、2.5倍和6倍、44倍。但同样处理条件下,Api6在RAW264.7细胞的表达没有明显上调；而炎症和高脂同时存在时,Api6在THP-1细胞中的表达却上调了2.7倍。④LXR受体激动剂T0901317可以使RAW264.7细胞中LXR的靶基因ABCA1和ABCG1基因表达分别上调22倍和7倍；THP-1巨噬细胞中ABCA1和ABCG1基因表达均上调9倍；但LXR受体激动剂T0901317没有改变Api6在RAW264.7细胞中的表达,Api6在THP-1细胞中的表达则上调了2倍。Api6在各种处理条件下表达水平的变化趋势与L,XRa的表达水平相关。
结论：200ng/ml的LPS和100μg/ml的oxLDL处理可以导致体外培养的RAW264.7和THP-1细胞出现异常的脂质蓄积。炎症、高脂状态下,Api6的表达水平与核受体LXR受体仅亚型的表达水平明显相关；由于缺乏LXRα受体,体外培养的小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞Api6基础表达量较低,因此可以作为载体细胞,用以建立过表达Api6的细胞模型深入研究Api6在脂质代谢中的作用。
肿瘤病理;巨噬细胞;基因表达;细胞生物学
重庆医科大学
硕士
营养与食品卫生学
练雪梅
2010
中文
R730.21;R392.12
46
2011-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）