MicroRNA-155在HBV/HCV相关原发性肝癌中的作用研究
原发性肝癌(HCC)是世界上排名第五的常见恶性肿瘤，每年新增病例50到100万。乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染是HCC发生发展的两个最重要的危险因素，全球超过80％的HCC病例具有HBV、HCV感染。HBV和HCV感染引起一系列的临床症状，包括急慢性肝炎，肝硬化和肝癌。
MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码小RNA，在进化上高度保守，最近被证实可以调节基因表达。越来越多的证据表明microRNA-155(miR-155)在调节炎症反应的过程中发挥重要作用。有研究表明巨噬细胞被poly(I∶C)刺激后，其miR-155表达量显著上调，诱导包括肿瘤坏死因子α(TNF-α)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)等信号通路的激活。因此，miR-155很可能参与介导和炎症反应相关的复杂的基因调节过程，而慢性炎症和癌症的发生发展有着密切的关系。最近的研究表明多种癌症的发生发展和miRNAs相关，miRNAs表达水平的改变可以导致一系列基因产物的异常表达，这些基因产物可参与形成有利于肿瘤发生的微环境，如慢性炎症和抗凋亡发生。很多报道指出miR-155在一些癌症中表达量显著上调，如Burkitt淋巴瘤和肺癌。MiR-155在恶性B淋巴细胞瘤发展过程中的促进作用已被证实。但是，目前对于在HBV或HCV感染的过程中miR-155的表达变化情况及其和肝细胞的凋亡、肝癌发生发展之间的关系尚不清楚。
基于以上研究基础，我们研究了miR-155是否在HBV/HCV相关的原发性肝癌(HBV/HCV-HCC)中发挥作用。首先从HCV单链RNA(ssRNA)序列中筛选出有效的免疫激活序列ORNhcvtail。体外实验中利用肝癌细胞系，体内实验利用无胸腺裸鼠肝癌模型，研究了miR-155的生物学功能。通过实时定量PCR方法检测了肝细胞及肝癌组织中miR-155的表达水平，并确定了miR-155的一个靶基因，进一步通过流式细胞技术和western blot分析研究了miR-155的生物学功能。
结果表明，在poly(I∶C)刺激的巨噬细胞中、HepG2.2.15细胞中(稳定转染HBVDNA的HepG2细胞)、转染了HCV-ORN的Huh7细胞中，miR-155表达水平分别较未处理的细胞升高了约4倍到30倍不等。在HBV/HCV相关的肝癌组织中，83％的HBV-HCC病人癌组织及75％的HCV-HCC病人癌组织中miR-155表达水平均显著上调。miR-155生物学功能方面，miR-155的过表达可促进肝癌细胞增殖：转染miR-155的Huh7细胞增殖率48小时后增加到155％。而抑制其表达能够有效的抑制肝癌细胞增殖；同时miR-155过表达抑制细胞凋亡。在裸鼠模型中，注射稳定转染了miR-155的Huh7细胞后40天，miR-155促进肿瘤生长的作用最显著。Western blot分析发现，在miR-155表达上调的HBV/HCV相关的原发性肝癌病人癌组织中，促凋亡蛋白Bax表达下调。在miR-155的作用机制方面研究表明： miR-155不影响转录因子p53或NF-κB的活性，而显著抑制C/EBPβ的表达活性。相反，当抑制miR-155表达后，C/EBPβ蛋白和Bax蛋白表达均升高。同时，在抑制C/EBPβ表达后，Bax蛋白表达也下调。
以上研究表明，miR-155与HBV或HCV相关肝癌的发生密切相关，miR-155可促进肝癌细胞增殖，抑制肝癌细胞凋亡，其分子机制之一是miR-155通过C/EBPβ转录活性抑制Bax蛋白表达和细胞凋亡，并最终促进肿瘤生长。因此，本研究进一步表明了miR-155是炎症和肿瘤发展过程中的重要调节因子，为预防肝损伤和肝癌发生发展寻找新的药物靶点奠定了基础。
原发性肝癌;乙型肝炎病毒感染;丙型肝炎病毒感染;MicroRNA-155;C/EBPβ蛋白;Bax蛋白;蛋白表达
第二军医大学
硕士
遗传学
王凯慧
2010
中文
R735.7
64
2010-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）