龙眼壳多糖的分离提取及其活性初步研究
目的：从龙眼干果壳中分离、提取龙眼壳多糖，对其进行初步化学分析和初步的免疫活性及抗肿瘤活性研究。
方法：通过正交实验来确定龙眼壳多糖最适的提取方法，并以此方法从中提取龙眼壳多糖；借助Sevage法-酶法和H2O2脱色素法分别对龙眼壳多糖脱蛋白和脱色素；多糖含量用硫酸-苯酚法进行测定；使用DEAE-纤维素柱层析和丙烯葡聚糖凝胶色谱S-300柱层析对龙眼壳多糖进行分级纯化。采用柱色谱、醋酸薄膜纤维电泳和比旋光度法检测龙眼壳多糖的纯度；通过凝胶色谱法测定龙眼壳多糖的分子量；通过三氟乙酸完全酸水解法测定龙眼壳多糖的单糖的成分。
在体外免疫活性的实验中，用MTT法测定龙眼壳多糖已除蛋白样品(LP1-2A)和龙眼壳多糖未除蛋白样品(LP1-2B)对小鼠脾淋巴细胞的增殖能力和ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞的增殖能力；酶联免疫吸附反应(ELISA)分析LP1-2A和LP1-2B对小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2和ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2的作用；LDH释放法测定LP1-2A和LP1-2B对NK细胞活性的作用。
在体内免疫活性的实验中，通过灌胃给药方式，MTT测定LP1-2A和LP1-2B对小鼠脾淋巴细胞的增殖能力和ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞的增殖能力、ELISA分析LP1-2A和LP1-2B对小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2和ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2的作用、LDH释放法测定LP1-2A和LP1-2B对NK细胞活性的作用。
在体外抗肿瘤的实验中，用MTT法测定LP1-2A和LP1-2B对肿瘤细胞Bel-7404、SKVO3、MCF-7的抑制作用。
在体内抗肿瘤实验中，腹腔接种S180腹水瘤细胞，小鼠灌胃给药LP1-2A和LP1-2B，计算小鼠的生命延长率。
结果：龙眼壳多糖的最适热水浸提条件为浸提温度为90℃，浸提时间为3.5h，料液比为1∶30，浸提次数为3次。在此条件下提取出的龙眼壳粗多糖的得率为1.31％，其中龙眼壳粗多糖的多糖含量为27.33％。龙眼壳多糖己除蛋白样品(LP1-2A)分子量为1.14×104u。红外光谱显示该龙眼壳多糖为α-D-型端基吡喃葡萄糖。完全酸水解后的龙眼壳多糖的单糖成分为葡萄糖。
LP1-2A和LP1-2B的体外免疫活性实验结果显示，体外单独促进正常小鼠脾淋巴细胞增殖作用和体外协同ConA促进正常小鼠脾淋巴细胞增殖作用实验中，浓度在300～4.7mg/L范围内，刺激指数均随着其浓度的增加而增加。体外直接作用对小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2影响和体外对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2影响实验中，浓度在300～4.7mg/L范围内，小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2的量随着其浓度的增加而增加。体外对正常小鼠脾脏NK细胞活性影响的实验中，浓度在300～4.7mg/L范围内，NK细胞活性随着其浓度的增加而增强。
LP1-2A和LP1-2B的体内免疫活性结果显示，体内单独促进正常小鼠脾淋巴细胞增殖作用和体内协同ConA促进正常小鼠脾淋巴细胞增殖作用实验中，剂量在250～62.5mg/L范围内，刺激指数随着其剂量的增加而增加。体内直接作用对小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2影响和体内对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2影响的实验中，剂量在250～62.5mg/L范围内，小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2的量随着剂量的增加而增加。体内对正常小鼠脾脏NK细胞活性影响的实验中，剂量在250～62.5mg/L范围内，NK细胞活性随着剂量的增加而增强。
LP1-2A和LP1-2B的体外抗肿瘤实验结果显示，在400～50mg/L的浓度范围内，随着浓度的增加，对肝癌细胞Bel-7404、卵巢癌细胞SKVO3、乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制率随着浓度的增加逐渐增加。
LP1-2A和LP1-2B的体内抗肿瘤结果显示，在320～80mg/L的剂量范围内，当剂量为320mg/L时，LP1-2A和LP1-2B对S180腹水瘤小鼠的生命延长率分别为74.47％和32.98％。
结论：龙眼壳多糖己除蛋白样品(LP1-2A)是α-D-型端基吡喃葡萄糖，其水解后的单糖成分是葡萄糖，其分子量为1.14×104u。LP1-2A和LP1-2B在体外和体内均有一定的免疫作用。LP1-2A和LP1-2B体外对肿瘤细胞Bel-7404、SKVO3、MCF-7有一定的抑制作用。LP1-2A和LP1-2B对S180腹水瘤小鼠的生存时间有一定的延长作用。
龙眼壳多糖;分离提取;单糖成分;免疫活性;抗肿瘤活性
广西医科大学
硕士
药物化学
李雪华
2010
中文
R282.71;R284.2
106
2010-09-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）