药用植物荞麦内生真菌的分离鉴定及其抗菌抗肿瘤活性研究
植物内生真菌是指在其整个生活史或者生活史的某一阶段生活在植物组织体内的一类并不引起明显病害症状的真菌。它们有着丰富多样的具有重要生物学活性的代谢产物，从植物中分离获得能够产生活性物质的内生真菌菌株有着重要的意义，同时也是目前微生物药物研发的一个热点。
金荞麦(Fagopyrum dibotrys)和苦荞麦(Fagopyrum tataricum)都是蓼科(Polygonaceae)荞麦属(Fagopyrum)植物，研究表明金荞苦荞植物提取物有抑菌、抗肿瘤、抗氧化、降血糖、降血脂等药理活性。目前我国对荞麦的研究多集中在植物化学成分分析，尚未见到对其内生真菌的研究报道。
本研究从金荞麦和苦荞麦的根、茎、叶、花中分离到62株内生真菌，采用K-B纸片法和细胞毒筛选模型(MTT法)分别对这些内生真菌发酵液的抗菌和抗肿瘤活性进行了测定。结果表明，有三株内生真菌的发酵液对大肠杆菌、黄瓜枯萎病菌等和人肝癌细胞株HepG2细胞生长有明显的抑制作用。对分离自苦荞花的内生真菌KQH-01和KQH-02的醇提物诱导HepG2细胞凋亡进行了荧光染色、DNAladder和流式细胞(FCM)分析显示，内生真菌KQH-01和KQH-02次生代谢醇提物能诱导HepG2细胞凋亡。
以ITS1和ITS4为引物，对活性菌株KQH-01、KQH-02和JQY-1的ITS序列进行了PCR扩增，并对扩增产物进行了测序，序列比对分析发现KQH-02为毛壳属(Chaetomium sp.)的球毛壳菌；JQY-1为葡萄座腔菌Botryosphaeria sp.)；而KQH-01的ITS序列与数据库中已知种类序列的同源性仅为94％，所以KQH-01可能是炭角菌属的一个新种或亚种，该序列已在GenBank中登录(Accession No.：FJ170815)。
对抑菌和抗肿瘤活性较高的KQH-02的次生代谢产物成分进行了初步的分析，GC-MS分析结果表明其乙醇提取物的甲醇提取成分主要有正十六酸(n-hexadecanoic acid)、十八烷酸(octadecanoic acid)、油酸(oleic acid)和棕榈油酸(hexadecenoic acid)等。KQH-01和KQH-02的次生代谢产物经HPLC分析得到了一个组分槲皮素(quercetin)。这为进一步的研究和开发内生真菌的生物活性物质打下了基础。
金荞苦荞;内生真菌;微生物鉴定;抗肿瘤活性
重庆大学
硕士
微生物学
殷幼平
2009
中文
Q949.32;Q93-331
62
2010-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）