以APOBEC3G为靶点的抗艾滋病药物筛选模型的构建与应用研究
APOBEC3G(hA3G)是在人的淋巴细胞中表达的一种RNA/DNA编辑酶，归属于APOBEC蛋白超家族成员。最新的研究结果表明hA3G可以高效抑制病毒的复制，是宿主细胞中固有的艾滋病病毒的限制因子。HIV—1病毒编码的Vif蛋白(病毒感染性因子)特异性地结合hA3G，通过泛素介导的降解途径，导致hA3G的降解，从而阻断了宿主细胞hA3G对HIV—1病毒复制的抑制作用。鉴于HIV—1主要的靶细胞均表达hA3G，阻断Vif介导的hA3G的降解途径成为一极具潜力的抗HIV—1病毒的新靶点。
本研究建立和优化了以Vif对hA3G的降解作用为靶点，生物荧光为检测手段的抗HlV—1药物筛选模型，并应用该初筛模型从化学物库、微生物次级代谢产物库筛选可以阻断Vif降解hA3G的活性物质。在7300个样品10000次以上的初筛中，获得64株阳性菌株及2个阳性化合物。为了确定阳性样品是否为Vif降解hA3G的特异性抑制剂，我们建立了一个用来排除蛋白酶体降解通路阻断剂的复筛模型，并应用这一模型从初筛阳性化合物和发酵液中，得到阳性样品36个。
当阳性样品加入到Vif和hA3G—YFP共表达的细胞培养中时，通过荧光显微镜下镜检和Western blot分析发现绌胞中荧光水平的恢复及融合蛋白hA3G—YFP表达水平的明显提高。这一结果验证了该模型可以用来筛选阻断Vif对hA3G降解作用的活性化合物。
采用HIV体外细胞培养系统，定性和定量地评估所得到的活性样品在细胞水平上的抗HIV活性，发现筛选到的阳性化合物IMB—26和IMB—35和9个阳性菌株发酵液可明显抑制HIV—1的复制。
通过化学结构优化和改造，合成了10余个阳性化合物的衍生物，其中IMB—261抗病毒活性较好，而且比较特异性抑制Vif对hA3G降解，成为较理想的抗HIV候选化合物。
抗艾滋病药物;药物筛选;APOBEC3G蛋白;抗艾滋病活性
清华大学医学部;北京协和医学院;中国医学科学院
硕士
微生物与生化药学
余利岩;岑山
2008
中文
R978.7
63
2010-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）