尿微量白蛋白胶体硒试纸条的初步制备
目前糖尿病的病死率仅次于心脑血管疾病和肿瘤，已成为威胁人类健康与生命的第三大疾病。糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病全身微血管合并症，也是糖尿病微血管病变最危险的并发症之一。由于DN的肾脏病变为慢性进行性损害，临床症状出现较晚，一般出现尿蛋白时病程多在10年以上，临床DN一旦出现持续性蛋白尿，其肾功能将不可遏制地进行下降。因此能够早期诊断、早期治疗以延缓糖尿病肾病的发展，是目前本病治疗的重点。尿微量白蛋白(Microalbuminuria， MAU)是指尿中白蛋白含量超出健康人参考范围，但不能用常规的方法检测出这种微量的变化。MAU是公认的糖尿病肾病的早期诊断指标，MAU含量检测对糖尿病肾病的早期诊断和早期治疗有重要的参考价值和临床意义。
目前检测MAU方法常见的有放射免疫法(RIA)、酶联免疫法(ELISA)和免疫比浊法。RIA法半衰期短、存在放射性污染。ELISA法虽然检出限较低(0.15 mg/L)，但是检测时间长，不适合现场测定；免疫比浊法简便快速，重复性好，1小时可检测30份以上样品，但需用高质量的特种蛋白分析仪。胶体硒免疫层析法克服了以上三种方法的缺点，同时又具有快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好、操作简便、无需任何仪器设备、结果判断直观可靠、经济实用的特点。
本实验通过动物常规免疫技术、细胞融合技术、杂交瘤细胞的选择性培养和克隆化，最后建立了4株稳定分泌抗人MAU单克隆抗体细胞株：A4、A11、C8、E4。在此基础上完成了单克隆抗体的制备、纯化及鉴定等方面的工作，由此选取E4和C8单抗来制备试纸条。通过抗坏血酸还原亚硒酸的反应制备胶体硒，利用免疫层析、硒标抗体和双抗夹心原理初步组装试纸条，通过抗原-抗体的特异性反应，以HSA抗原作为样品，进行了初步的试纸条效能实验，取得了一定的效果。
尿微量白蛋白;杂交瘤细胞;单克隆抗体;胶体硒;试纸条
兰州大学
硕士
微生物学
李红玉
2009
中文
R446.6;R587.1
62
2009-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）