福建省两种双生病毒的致病机制研究
本文对福建省杂草上的双生病毒进行了鉴定，并对其致病机制作了初步研究。
从福建省福州地区采集了表现有典型双生病毒症状的野葛(Pueraria montana)病样，通用引物PA/PB对野葛样品进行了特异PCR检测，结果发现，样品中有大约500 bp的条带，表明此野葛中极有可能含有双生病毒。随机选择了三个克隆Yg1、Yg2及Yg3进行序列测定，测序结果表明此三个克隆之间的差异极小，核苷酸序列同源性均在98.8％以上(登录号FJ539016，FJ539017和FJ539018)，说明此样品很可能是由同一种双生病毒侵染。在此基础上，我们对Yg3样品中的双生病毒的全基因组进行了研究。
通过一对背靠背引物获得了Yg3的全基因组序列，测序表明，Yg3 DNA-A全长2729 nt(登录号FJ539014)，具有典型的粉虱传双生病毒特征：共编码6个开放阅读框(open reading frames，ORF)，其中正义链编码2个ORFs，分别为AV1和AV2，反义链编码AC1、AC2、AC3和AC4四个ORFs，其茎环结构区含有TAATATTAC保守序列。经NCBI检索和BLAST比对发现，Yg3 DNA-A与野葛花叶病毒DNA-A(Kudzu mosaic virus-[Vietnam：Hoabinh：2005]DNA-A，KuMV-[VN：Hoa：05]DNA-A，登录号DQ641690)同源性最高，为92.9％。
用Beta01/Beta02特异引物并未发现有DNA-β存在，然而用TempliPhiTM Kit试剂盒扩增得到2677 bp的片段(登录号FJ539015)，NCBI BLAST比对发现其与野葛花叶病毒DNA-B(Kudzu mosaic virus-[Vietnam：Hoabinh：2005]DNA-B，KuMV-[VN：Hoa：05]DNA-B，登录号DQ641691)同源性最高，为81.7％。由此，我们确定Yg3为野葛花叶病毒(Kudzu mosaic virus，KuMV)的一个分离物，并将其命名为野葛花叶病毒分离物Yg3(Kudzu mosaic virus Yg3 isolate，KuMV-Yg3)。Yg3 DNA-B编码两个ORFs，即反义链上的BC1和正义链上的BV1，同时也含有保守序列TAATATTAC。
为了研究KuMV DNA-A和DNA-B在致病中的作用，我们构建了KuMV-Yg3DNA-A和DNA-B的侵染性克隆，注射本氏烟(Nicotiana benthamiana)后发现，共同接种DNA-A和DNA-B的烟草叶片出现黄色褪绿斑点症状，而单独接种DNA-A或DNA-B的烟草中未出现任何症状。
另外，我们对胜红蓟黄脉病毒福建烟草分离物F2(Ageratumyellow vein virus-F2，AYVV-F2)的DNA-A(登录号EF527823)及其伴随DNA-β(登录号EF527824)及本实验室保存的一个缺陷型DNA-β(ADNA，登录号FJ605171)进行了侵染性克隆的构建，以期对其致病机制进行初步探讨。注射烟草后发现，AYVV-F2 DNA-A+DNA-β或者AYVV-F2 DNA-A+ADNA-β这两种组合都能引起本氏烟(Nicotiana benthamiana)及普通烟(Nicotiana tobacum)轻微的黄脉症状。
野葛花叶病毒;分离物Yg3;胜红蓟黄脉病毒;烟草分离物F2;侵染性克隆;致病机制;基因组序列;粉虱
福建农林大学
硕士
微生物学
吴祖建
2009
中文
S433.3;Q943.2
60
2009-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）