抑制Dicer基因对乳腺癌细胞MCF-7周期和药物敏感性的影响
Dicer是microRNA(miRNA)合成过程中的重要酶类,参与miRNA的剪切和成熟。目前研究已经证实了多种miRNA参与了肿瘤的发生和发展过程,一些肿瘤中亦可见Dicer的异常表达,但Dicer在其中所起的作用不清。本研究拟通过RNA技术干扰Dicer基因的表达,观察乳腺癌细胞系MCF—7生物学特性及细胞对顺铂Platinum药物敏感性的改变,探讨Dicer对肿瘤细胞增殖和药物敏感性的影响,为提高乳腺癌治疗效果提供理论指导。合成带有荧光标记、特异性干扰Dicer基因的siRNA序列,应用脂质体lipofectamine2000转染乳腺癌细胞MCF—7,半定量RT-PCR检测不同时间点的转染效率并用Western blot方法验证。在干扰效率最高的时间点,流式细胞术检测转染后MCF—7细胞周期的变化,XTT法评价转染前后细胞对不同浓度化疗药物顺铂(Platinum)生长抑制率的变化。RT-PCR检测MCF—7内miR—21表达量的变化,Western blot检测和细胞周期相关的蛋白p21、p27、CDK2、CDK4表达量的变化。通过实验我们发现,siRNA序列能特异性的抑制MCF—7细胞Dicer的表达,转染后48小时抑制效果最明显,此时细胞出现明显的G1期阻滞,转染后MCF—7细胞在顺铂浓度为2.5μM、5.0μM、10μM的剂量下药物敏感性提高。进一步研究发现siRNA转染组p21,p27的蛋白表达升高,在乳腺癌中发挥癌在基因作用的miR—21明显减少。由此我们得出结论,干扰Dicer基因能够引起MCF—7细胞G1期阻滞,细胞对化疗药物顺铂的敏感性提高,这与细胞周期调控和增殖调控相关的miRNA的改变有关。Dicer干扰为提高肿瘤治疗敏感性、改善病人生存率提供了新的策略。
乳腺癌;Dicer基因;MCF-7;细胞周期;药物敏感性
清华大学医学部;北京协和医学院;中国医学科学院
硕士
内科学
赵春华
2008
中文
R737.9
60
2009-09-28(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)