采用RNA干扰方法特异性降低胚胎干细胞中Nanog的表达
目的:应用RNA干扰方法特异性地降低胚胎干细胞中Nanog的表达。
方法:设计并合成四条针对Nanog序列的干扰片断，利用Cy3标记siRNA，利用流式方法检测siRNA的转染效率。siRNA转染J1细胞后，利用RT-PCR、Real-TimePCR、Western—Blot方法检测各个片断对J1细胞中Nanog表达的影响。
结果:lRT-PCR结果显示在这四个片断中Nanog-P1、Nanog-P4能够比较明显地降低J1细胞中Nanog的表达。Real-TimePCR检测Nanog-P1对儿细胞中Nanog的干扰效率可达90％。Western—Blot结果显示J1细胞转染Nanog-P1后Nanog蛋白表达量也明显下降。
结论:Nanog-P1可有效降低J1细胞中Nanog的表达，干扰效率达90％左右。利用该片断特异性地降低J1细胞中Nanog的表达可以用于研究Nanog在胚胎干细胞中的作用机制。
胚胎干细胞;RNA干扰;Nanog序列;蛋白表达;Cy3标记
清华大学医学部;北京协和医学院;中国医学科学院
硕士
细胞生物学
陆敏
2008
中文
R392.12;R457.7
88
2009-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）