HGF基因修饰的骨髓间充质干细胞移植在输尿管梗阻大鼠肾脏中的分布
目的：
梗阻性肾病(obstructive nephropathy，ON)是泌尿外科常见疾病，以肾小管间质纤维化为主要病理特点。儿童梗阻性肾病最终可导致终末期肾脏疾病(end-stage renal disease ESRD)，梗阻性肾病占所有ESRD的0.3％，占所有儿童肾移植的16.1％。
骨髓间充质干细胞(MSCs)具有自我增殖和多向分化潜能的特点，可向中胚层、内胚层和神经外胚层来源的组织细胞分化，包括成骨细胞、心肌细胞、神经细胞和肾脏细胞等，有研究表明骨髓MSCs在急性肾脏损伤小鼠模型中可以促进肾脏结构修复、改善肾功能。肝细胞生长因子(HGF)是促进成体干细胞向肾脏细胞分化的候选因子，还具有阻止肾小管细胞发生凋亡的能力。
本实验通过体外分离、培养、纯化和扩增大鼠骨髓MSCs，用带有肝细胞生长因子基因的腺病毒(Ad-HGF)进行转染，并建立单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠动物模型，将转染Ad-HGF的MSCs移植入UUO大鼠体内，观察其是否能够迁移、分布、定居到肾脏，为梗阻性肾病的基因治疗及细胞替代治疗提供一定的理论基础。
材料与方法：
体外分离、培养雄性SD大鼠MSCs，流式细胞仪进行CD34、CD90表型鉴定；以不同强度携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒(Ad-GFP)转染MSCs，用流式细胞仪测定转染效率，筛选出最佳转染强度(MOI)，并以最佳转染强度将HGF基因体外转染MSCs；用ELISA法检测转染后MSCs的HGF表达水平。
选择雌性2月龄SD大鼠16只，制作UUO大鼠动物模型，随机分为移植组和对照组，再以UUO术后7、14天各分为2组，每组各4只。于UUO术后6小时内将转染Ad-HGF的MSCs经鼠尾静脉注射到移植组大鼠体内，对照组注射等量生理盐水，于UUO术后7、14天分别处死移植组及对照组大鼠，取双侧肾脏，制作石蜡切片，利用Y染色体原位杂交方法检测转染Ad-HGF的MSCs在UUO大鼠肾脏中的分布情况。
结果：
1、骨髓MSCs原代培养7-9天可传代，传代后细胞增殖加快，4-5天可再次传代；流式细胞仪鉴定结果显示骨髓MSCs中CD90阳性细胞占99％，不表达CD34。
2、转染强度MOI=400时，转染效率可达73.29％。
3、Ad-HGF转染MSCs48小时，细胞培养上清HGF表达含量达到最高峰。
4、Y染色体原位杂交结果表明：在UUO大鼠术后7、14天梗阻侧肾脏均可见Sry阳性细胞，而梗阻对侧肾脏及对照组双侧肾脏均未见Sry阳性细胞。
结论：
1、贴壁细胞分离法可以分离、纯化大鼠MSCs。
2、MSCs可作为基因载体细胞，用于HGF的基因治疗。
3、在UUO大鼠模型中，经鼠尾静脉注射Ad-HGF转染的MSCs可以靶向定位到梗阻侧肾脏。
梗阻性肾病;骨髓间充质干细胞移植;HGF基因修饰;输尿管梗阻
中国医科大学
硕士
儿科学
杨屹
2009
中文
R726.9;R693.2
36
2009-09-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）