膀胱过度活动症大鼠逼尿肌中嘌呤能受体P2X<,1>的表达
膀胱过度活动症(Overactive bladder，OAB)是一种以症状学诊断为基础的新的概念。国际尿控学会2002年将OAB的概念正式定义为一种提示下尿路功能障碍的症状综合征，主要表现为尿急，伴或不伴急迫性尿失禁，通常伴有尿频和夜尿，严重的可因尿不净导致双肾、输尿管积水而形成肾功能损害，从而危及生命。OAB多由逼尿肌的无抑制性收缩所致，其发病率很高，对患者的生理和心理发育均有严重的影响，使生活质量下降。
OAB的病因复杂，目前尚不完全清楚，主要与膀胱尿道神经源性、解剖和功能异常有关。目前虽然对OAB的治疗方法很多，但只能缓解症状，不能达到治愈。因此正确的治疗和处理OAB非常必要。
P2X受体是近年来新发现的一种嘌呤能ATP受体，它广泛分布于全身各种组织，主要参与平滑肌的舒张与收缩调节，在人类的膀胱感觉和逼尿肌收缩方面起重要作用，但其在OAB的发生、发展过程中具体机制尚不完全清楚。由于很难得到人类OAB的组织标本，故本研究在成功制做OAB大鼠模型的基础上，经尿动力学检查确定诊断，获取OAB大鼠膀胱组织；应用RT-PCR、免疫组化等方法检测P2X1受体在正常大鼠以及OAB大鼠膀胱逼尿肌中的表达，初步探讨P2X1受体在OAB时膀胱舒缩功能调节中的作用及其与膀胱功能障碍的关系，为临床治疗OAB所引起的膀胱功能障碍提供新的理论依据。
实验材料
一、实验动物
雌性Wistar大白鼠32只，3-4个月，250克左右，购自中国医科大学附属盛京医院动物中心。
二、实验试剂
总RNA分离试剂(tiands，中国天泽基因工程有限公司)；RT-PCR试剂盒，DNA聚合酶(TAKaRa，大连宝生物工程有限公司)；P2X1受体亚型基因mRNA引物为美国Medline国立图书馆基因库检索基因，计算机Primer5.0版软件自行设计(英俊生物技术有限公司)；一抗P2X1受体抗体(chemicon公司，美国)，免疫组化UltraSensitiveTMSP超敏试剂盒(购自福州迈新生物技术开发有限公司)。
三、主要实验仪器设备
眼科手术器械；紫外分光光度计(UV-1201型，SHIMAD2u，Japan)；PCR扩增仪(Biotron，Germany)；台式低温高速离心机(5417R，EppendorfAG，Germany)水平电泳槽及电泳仪均产自中国；自动电泳凝胶成像分析仪(Kodak，1D，USA)；Leica RM2025型石蜡切片机(德国)；Nikon型光学显微镜(Nikon Eclipse E800microscope，Kawasaki，Kanagawa，日本)；医用微波炉(Galantz)。
实验方法
1、所有32只大鼠经尿动力学检查无异常后，纳入实验研究。分为正常对照组(A组，10只)和模型组(B组，22只)。B组大鼠全部进行动物实验，结扎大鼠膀胱-尿道交界处，造成膀胱出口部分梗阻，再经尿动力学检测，以充盈期逼尿肌出现无抑制性收缩为诊断OAB的标准，根据OAB的有无将B组再分为B2组(膀胱过度活动症组)和B1组(模型对照组)。
2、采用RT-PCR、免疫组织化学的方法检测P2X1受体在正常大鼠和OAB大鼠逼尿肌中的表达情况，探讨P2X1受体在OAB膀胱功能调节中的作用及其与膀胱功能障碍的关系。
3、所有数据均以-x±s表示，采用SPSS13.0统计软件进行t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
结果：
一、动物模型及尿动力学检测结果
A组10只大鼠全部存活，无OAB出现，膀胱壁光滑，弹性良好。B组22只大鼠，因尿路感染等原因死亡3只，存活19只。经尿动力学检测，A组膀胱充盈期曲线平滑，无逼尿肌收缩，排尿期逼尿肌反射正常(18.1±4.7cmH2O)；最大膀胱灌注量为0.5ml；B组中52％(10/19)存在OAB(B2组)，表现为膀胱壁增厚，弹性较差。膀胱在充盈期有不规律的无抑制性收缩，逼尿肌收缩时于尿道外口有尿液溢出，单位时向内非抑制性收缩的发生频率为(2.9±1.2次/min)，排尿期未见明显的逼尿肌反射；B组中47％(9/19)无OAB(B1组)，表现为膀胱壁光滑，弹性良好。膀胱于充盈期未见明显的逼尿肌收缩及溢尿现象。
二、RT-PCR结果
A组、B1组及B2组的膀胱逼尿肌中均有P2X1受体mRNA的表达，其相对表达量分别为(1.805±0.102)、(1.821±0.068)和(1.968±0.063)。P2X1受体mRNA在B2组大鼠膀胱逼尿肌中的表达较A、B1组高，具有统计学意义(P<0.01)。B1组P2X1受体mRNA较A组表达无明显差异，无统计学意义(P=0.737)
三、免疫组织化学结果
A组、B1组及B2组中膀胱逼尿肌细胞的胞浆中均有P2X1受体的表达，B2组与A组、B1组相比，膀胱粘膜增厚，肌纤维增粗，肌丝紊乱，其膀胱逼尿肌中免疫阳性颗粒呈现深染，较A组、B1组数量明显增多。A组、B1组膀胱逼尿肌中黄褐色免疫阳性颗粒数量较少，颜色较浅，二者无明显差异。
结论：
1、大鼠的下尿路梗阻，可引起膀胱的神经和功能性损害继而出现OAB，因此可确认下尿路梗阻是引起逼尿肌不稳定的重要因素。
2、OAB大鼠逼尿肌中P2X1受体表达较正常大鼠增高，提示P2X1受体可能对OAB时膀胱舒缩功能障碍的发病机制起重要作用；这种增高可能与膀胱功能受损密切相关。
膀胱过度活动症;逼尿肌;中嘌呤能受体;P2X1表达;临床治疗
中国医科大学
硕士
儿科学
王伟
2009
中文
R726.9;R694
33
2009-09-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）