嘌呤受体亚型P2Y<,2>在先天性巨结肠中的表达及意义
先天性巨结肠(Hirschsprung's disease，HD)是婴幼儿常见的消化道畸形，是一种肠神经系统(Enteric nervous system，ENS)发育异常的疾病。神经嵴源性细胞进入肠道后逐渐迁移、增殖、受肠道微环境影响后停止增殖，逐渐聚集最终分化形成神经节细胞及胶质细胞，构成肠神经节，在此过程中出现任何异常都可能导致神经节细胞的缺失，最终形成HD。
三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate，ATP)作为一种神经递质，可能参与了神经元的分化、迁移、存活，还可以促进神经元的修复，其作用的发挥必需与受体结合，其受体有P1、P2两种，P2受体又分为P2X、P2Y。目前为止已发现的P2Y有8个亚型，其中在胃肠道P2Y2亚型分布最为广泛。在肠神经系统内，P2Y受体主要调节肌肉的松弛，在肠神经系统发育过程中如果P2Y2表达缺失可能导致肠管的松弛功能障碍，从而使肠管处于持续痉挛状态，这揭示了P2Y2与HD的发生存在一定关系，但P2Y2在HD肠管的表达及分布情况国内尚未见报导。
本研究通过观察HD患儿正常段、移行段和痉挛段内P2Y2受体的分布及相对表达量，以正常段为对照组，移行段及痉挛段分别设为实验组1和实验组2，比较相互之间P2Y2的分布及表达情况是否存在差异，进一步探讨这种差异在HD发病机制中的意义。
材料与方法：
一、病例标本
收集来自中国医科大学附属盛京医院小儿外科的30例经手术根治的HD患儿的手术标本，患儿年龄为23天-5.5月(男25例，女5例，平均年龄67.37±42.28天)，其中长段型5例，短段型6例，常见型19例。
二、实验试剂
P2Y2多克隆抗体(购自美国Abcam公司)；二步法山羊免疫组化检测试剂盒(购自武汉博士德公司)；逆转录试剂盒(购自大连宝生物工程有限公司)。
三、实验方法
选取患儿肠管标本的正常段、移行段和痉挛段全层组织分别设为对照组、实验组1及实验组2，通过免疫组化方法及RT-PCR方法观察P2Y2在各组中的分布及表达，所有数据均以-x±s表示，差异比较采用SPSS13.0统计软件分析，组间差异采用方差分析，p<0.05表示差异有统计学意义。
结果：
一、免疫组化结果
在对照组及实验组1肠管标本的纵肌层、环肌层和肌间的神经丛中可见P2Y2阳性细胞的分布及表达，与对照组相比较，实验组1中P2Y2阳性细胞的数目少且免疫反应较弱，差异具有统计学意义(p<0.01)。实验组2肠管标本中则未见P2Y2阳性细胞的分布及表达，与对照组相比差异明显(p<0.01)。
二、RT-PCR实验结果
在对照组(正常段肠管)及实验组1(移行段肠管)中P2Y2 mRNA均有表达，相对表达量分别为(0.5736±0.07066)、(0.2679±0.3817)，其差别具有统计学意义(p=0.000)，P2Y2mRNA在实验组2(痉挛段肠管)中无明显表达，其与对照组、实验组1标本中P2Y2的表达具有显著性差异(p分别为0.00，0.011)。
结论：
与正常段肠管组织相比，HD患儿病变段肠管中ATP受体P2Y2表达缺失或者显著减低，P2Y2的表达缺失可能导致肠管的松弛功能障碍使肠管处于痉挛状态，有可能在HD的发生过程中发挥了一定的作用。
先天性巨结肠;发病机制;P2Y2受体;肠管组织;病变过程;松弛功能障碍
中国医科大学
硕士
儿科学
黄英
2009
中文
R725.7
33
2009-09-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）