胰岛素对内毒素血症幼鼠肝损伤保护作用的实验研究
目的：通过建立幼鼠内毒素血症肝损伤的动物模型并予以胰岛素干预，研究胰岛素对LPS诱导的幼鼠肝细胞释放炎症因子TNF-α和IL-6的影响，以及TNF-α和IL-6与NF-кB活化水平的关系，了解胰岛素是否对内毒素血症所致的幼鼠肝损伤具有保护作用，并探讨其作用机制。
方法：18日龄wistar幼鼠72只随机分正常对照组(腹腔注射生理盐水，n=8)、内毒素血症组(LPS组，腹腔注射LPS，n=32)和胰岛素治疗组(腹腔注射LPS+皮内注射胰岛素，n=32)。LPS组和胰岛素治疗组LPS(5mg/kg)腹腔注射建立幼鼠内毒素血症模型，胰岛素组同时给予胰岛素(4IU/kg)皮内注射；正常对照组腹腔注射等容量生理盐水；LPS组和胰岛素治疗组根据建模后取标本时间的不同分2h、6h、12h、24h四个亚组，每个亚组8只，取肝脏制备石蜡切片和组织匀浆，普通光镜、电镜观察各组肝细胞的病理改变情况，ELISA法测定肝组织匀浆TNF-α和IL-6的含量，快速血糖仪检测幼鼠血糖浓度，赖氏法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)的浓度，免疫组化法检测肝组织NF-кB的活化水平，并对结果进行统计学分析。
结果：
1、组织学改变：光镜下正常对照组肝细胞完整，结构清晰，未见变性和坏死；LPS组肝组织损伤较明显，肝细胞出现肿胀、空泡样变性、汇管区有炎症细胞浸润，点片状、大片状坏死等，以6h最明显，损伤等级评分与正常对照组比较差异有统计学意义(p<0.05)，胰岛素治疗组肝组织损伤均轻于LPS组，6h损伤等级评分与LPS组比较差异有统计学意义，p<0.05；电镜下正常对照组内质网光滑，核膜完整，染色质均匀分布于核内；LPS组见胞浆疏松，线粒体肿胀，脊断裂或消失，内质网扩张，核膜出现切迹，染色质浓缩在核周边，核仁碎裂，损害以6h组最为明显；胰岛素治疗组各时点肝组织病理损害较LPS组轻。
2、血糖水平：胰岛素治疗组在2h和6h比正常对照组、LPS组低(p<0.05)，12h、24h各组之间差异均无统计学意义(p>0.05)。
3、ALT水平：2h各组之间差异无统计学意义(p>0.05)，LPS组6h、12h及24h均较正常对照组高(p<0.05)，胰岛素治疗组在6h、12h、24h均较LPS组降低(p<0.05)，但仍高于正常对照组。
4、肝细胞NF-кBp65蛋白的表达：LPS组核阳性细胞百分比较正常对照组高，差异有统计学意义(p<0.05)；胰岛素治疗组2h、6hNF-кBp65核阳性细胞百分比均明显低于LPS组(p<0.05)。
5、肝组织TNF-α、IL-6水平：在6h、12hLPS组高于正常对照组和胰岛素治疗组，差异有统计学意义(p<0.05)。
结论：
1.内毒素血症可引起肝损伤，导致肝细胞的破坏和肝功能的改变，说明肝脏是重症感染的受累器官之一；
2.NF-кB的活化参与了内毒素血症肝损伤的发生，其机理可能是通过介导炎性介质TNF-α和IL-6的合成使肝细胞发生炎性损伤；
3.胰岛素对内毒素血症肝损伤有保护作用，其机理可能是通过降低NF-кB的活化，减少TNF-α和IL-6的合成和释放，降低应激反应时期的血糖而起作用，但确切的机制有待进一步研究。
胰岛素;内毒素血症;肝损伤;损伤保护
广西医科大学
硕士
儿科学
王琳琳
2009
中文
R657.3;R631.1
51
2009-08-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）