高产β-葡聚糖酶菌种选育及产酶条件研究
本文从自然界筛选高产β—葡聚糖酶的菌种，对发酵培养基、发酵条件进行研究，菌株进行了鉴定，并通过紫外线对菌株进行诱变，进一步提高菌株的产酶性能，最后利用二步发酵法研究了发酵工艺对菌株产酶的影响。
1．根据产β—葡聚糖酶菌种的特性，设计了菌种富集培养基、初筛培养基和筛选路线。在不同地方采集土壤样品，筛选到63株产酶菌株，其中透明圈直径与菌落直径之比较大的有11株，经过复筛及摇床发酵试验，确定了一株酶活为16.34IU/mL菌株为研究对象，记为H325。
2．对菌株H325的发酵培养基进行了优化：通过单因素试验，研究了不同碳源、不同氮源、无机盐对菌株H325产酶的影响，并在单因素试验的基础上，利用正交试验设计优化确定了最佳产酶培养基的配方：燕麦粉1.5g/100mL，玉米浆2.5g/100mL，NH4NO30.2g/100mL，MgSO40.02g/100mL，FeSO4·7H2O0.01g/100mL，CaCO30.5g/100mL，Na2HPO40.05g/100mL。在最佳产酶培养基上，菌株H325产酶活性达53.85IU/mL，比初始设计培养基提高了229.56％。
3．对发酵条件进行优化，确定了菌株H325产酶的最佳发酵条件为：培养基初始pH6.0，培养温度30℃，接种量0.5mL(孢子悬液浓度为1.0×106个/mL)，培养基装量50mL/250mL，培养时间60h，吐温-80浓度0.1mL/100mL，β—葡聚糖0.05g/100mL。在上述最适培养条件和改良产酶培养基下，菌株H325产酶活性为82.92IU/mL，比初始产酶培养基和培养条件下提高了450.31％。
4．对菌株H325的菌落、菌丝及孢子形态特征的观察，将其初步确定为黑曲霉属(Aspergillusniger H325)。
5．利用紫外线对野生菌株H325进行诱变，利用刚果红营养鉴定平板进行初步筛选，再通过摇床发酵培养，最终得到一株正向突变株H325-13，其酶活为85.38 IU/mL，比出发菌株提高2.97％。同时对该突变株的遗传稳定性进行了研究，得出突变株H325-13产酶较稳定。
6．研究了发酵工艺对产酶的影响，结果表明采用两步发酵工艺进行产酶发酵酶活达94.28IU/mL，比一步发酵高出了11.36个酶活单位；同时其发酵周期也大大缩短，缩短达22h。
β-葡聚糖酶;菌种选育;产酶条件;发酵工艺
西南大学
硕士
微生物学
张惟广
2009
中文
TQ925
49
2009-08-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）