6，8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素在Caco-2模型的跨膜转运及首过糖基化速率研究
目的：通过比较白杨素(ChR)及其衍生物6，8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素(dFMAChR)在人结肠腺癌(Caco-2)细胞模型的跨膜转运及首过糖基化速率，为寻找具有良好的药动学特性的活性新化学实体提供实验依据。
方法：建立精确灵敏、重复性好的ChR及dFMAChR的高效液相(HPLC)检测方法，并测定其理化性质；MTT法测定ChR和dFMAChR对Caco-2细胞的毒性作用。体外培养Caco-2细胞，用Transwell建立单层细胞模型；确定ChR和dFMAChR转运的最佳pH条件。评价时间、浓度对dFMAChR和ChR的双向转运的影响，HPLC检测药物含量，计算转运速率及表观渗透系数。评价时间对ChR和dFMAChR葡萄糖醛酸化产物形成的影响，用β-葡萄糖醛酸苷酶水解葡萄糖醛酸结合物，HPLC检测，计算葡萄糖基化速率。
结果：50μmol/L的ChR和dFMAChR在pH7.4，37℃的PBS中孵育24h后，两者的饱和溶解度分别是4.28±0.56μmol/L，2.05±0.44μmol/L。随着溶液pH升高dFMAChR稳定性(检测的原药量)较ChR的稳定性显著提高。MTT法测定结果表明，在一定浓度范围内，ChR和dFMAChR对Caco-2细胞毒性作用较小，即使两者浓度高达100μmol/L，受试物对Caco-2细胞的增殖活性无显著抑制作用。Caco-2细胞培养21天后，成功建立细胞单层模型。随着转运介质pH值升高，dFMAChR和ChR的转运速率降低，但相同浓度下dFMAChR的转运速率显著快与ChR的转运速率。ChR和dFMAChR的转运依赖于时间和浓度，几乎呈线性关系。从Apiral(A，肠腔面)到Basolateral(B，基底面)的转运占优势，但相差不大。而且，无论是从A-B侧转运还是从B-A侧转运dFMAChR较ChR转运速率显著提高。ChR和dFMAChR的葡萄糖醛酸化产物随时间的增加而增加，dFMAChR较ChR的糖基化速率显著降低。结束转运时，均能在Transwell两侧检测到ChR和dFMAChR的葡萄糖醛酸化产物，而且肠腔侧(A侧)检测代谢产物含量高于基底膜侧(B侧)。
结论：白杨素经选择性引进三氟甲基和乙酰基后，获得的衍生物dFMAChR较白杨素化学稳定性提高，水溶性降低。在Caco-2模型中，dFMAChR和ChR均由被动扩散方式转运，dFMAChR的转运速率高于ChR，可能与其化学稳定性提高有关。另外，dFMAChR葡萄糖醛酸化程度较ChR显著降低说明其代谢稳定性增加，首过代谢是白杨素吸收差的主要原因之一。
白杨素;白杨素衍生物;Caco-2模型;跨膜转运;结肠腺癌;糖基化速率
南华大学
硕士
药理学
曹建国
2007
中文
R979.1;R735.35
51
2009-07-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）