RNAi抑制HL-60细胞FLT3基因表达及诱导凋亡的研究
RNAi抑制Hl-60细胞FLT3基因表达及诱导凋亡的研究FLT3基因的突变、过度表达与急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)的发生密切相关。AML中最常见的突变有FLT3内串联复制(internaltandemduplication,FLT3-TTD)和FLT3激酶区活化环内的点突变(Kinasedomainmutation:KDM)两种形式。
RNAi是双链RNA介导的遗传干涉现象,它能够特异、有效地降解mRNA,从而引起转录后水平的基因沉默。这为肿瘤的预防和治疗提供了新的方法和思路。
目的:针对FLT3基因构建shRNA-FLT3的表达载体pGenesil-1-shRNA-FLT3,转染HL-60细胞,研究RNAi对HL-60细胞FLT3基因表达及诱导凋亡作用的影响,为AML的预防和治疗提供新的思路。
方法:根据RNAi原理,构建siRNA的表达载体pGenesil-1-shRNA-FLT3,先后用脂质体法和电穿孔法转染HL-60细胞,用RT-PCR检测FLT3的mRNA表达,Westernblot检测FLT3蛋白水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,MTT检测细胞生长活力。
结果:成功构建了shRNA-FLT3表达载体pGenesil-1-shRNA-FLT3。转染HL-60细胞48d,时后,RT-PCR、Westernblot检测显示FLT3的mRNA表达明显受到抑制(p<0.05),FLT3蛋白质的表达下降(p<0.05),流式细胞仪检测显示可诱导细胞凋亡(p<0.05),MTT检测显示细胞生长活力降低(p<0.05)。
结论:FLT3在AML的发生与发展中确实起着重要的作用。所设计的FLT3-siRNA均能抑制FLT3基因表达并能诱导HL-60细胞凋亡。4条FLT3-siRNA均有效,可用于后期的动物体内实验。HL-60细胞不能被脂质体转染试剂Lipofectamine2000、Metafectene、Sofast等转染,电穿孔法可转染成功。
急性髓系白血病;HL-60细胞;FLT3基因;基因表达;细胞凋亡
佳木斯大学
硕士
生物化学与分子生物学
王昭;欧芹
2008
中文
R733.71
59
2009-03-31(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)