骨髓瘤细胞Dkk-1mRNA表达及对成骨细胞的影响
[目的]:检测骨髓瘤细胞株8226和骨肉瘤细胞株MG63细胞株培养上清液中Dkk-1的mRNA表达，持续观察两种上清液对成骨细胞增殖和ALP表达水平的影响及拮抗蛋白Dkk-1对成骨细胞的影响和在多发性骨髓瘤中的作用。
[方法]:
1.RT-PCR测定骨髓瘤细胞株8226和骨肉瘤细胞株MG63中Dkk-1mRNA的表达情况。
2.人多发性骨髓瘤细胞株8226和骨肉瘤株MG63置于培养瓶中，MEM完全培养液培养2天后换液，1800rpm离心，上清液用0.22μm微孔滤膜过滤除细胞碎片，置于-70℃低温冰箱保存备用。
3.MG63上清液和Dkk-1抗体加入鼠胚成骨细胞M3T3-El培养体系中，采用CASY，CCK-8，ALP染色，ALP水平检测M3T3-El细胞的变化。
4.8226上清液和Dkk-1抗体加入鼠胚成骨细胞3T3-El培养体系中，采用CASY，CCK-8，ALP染色，ALP水平检测M3T3-El细胞的变化。
[结果]:Rt-PCR检测人多发性骨髓瘤细胞株8226和骨肉瘤株MG63表达Dkk-1，但2种细胞表达程度不同；人多发性骨髓瘤细胞株8226和骨肉瘤株MG63培养上清液能够明显抑制MC3T3E1细胞，抑制程度和上清液浓度呈正相关性，10％，20％，30％MG63上清液加入MC3T3E1细胞培养液中，CASY计数分别为5.2±0.5X106(P＜0.01)，4.2±0.6X106(P＜0.01)，3.9±0.7X105(P＜0.01)，而正常培养液组为6.1±0.8x105；加入DKK-1抗体后能够部分拮抗骨肉瘤株MG63培养上清液对成骨细胞的抑制，CASY计数分别为2.1±0.4X105，2.8±0.7X105(P＜0.01)；但是不影响人多发性骨髓瘤细胞株8226培养上清液对成骨细胞的抑制，CASY计数分别为2.9±0.9X105，3.0±0.7X105(P＞0.05)。
碱性磷酸酶是成骨细胞分化成熟的标志，MC3T3E1细胞处于成骨细胞的早期阶段，碱性磷酸酶表达水平较低，在50ng/ml浓度的BMP-2(骨形成蛋白)诱导作用下，MC3T3E1细胞ALP表达增高，ALP染色强阳性。20％骨肉瘤株MG63和人多发性骨髓瘤细胞株8226培养上清液能够明显抑制MC3T3E1细胞ALP水平，碱性磷酸酶试剂盒检测为4.53±0.4U/100ml(P＜0.01)，5.85±0.6U/100ml(P＜0.01)，正常组为7.23±1.0U/100ml；加入DKK-1抗体后能够部分拮抗骨肉瘤株MG63培养上清液对成骨细胞的抑制5.66±0.9U/100ml(P＜0.05)，但是不影响人多发性骨髓瘤细胞株8226培养上清液对成骨细胞的抑制6.13±1.1U/100ml(P＞0.05)。
[结论]:Dkk-1能够抑制成骨细胞MC3T3E1的增殖和ALP活性，抑制程度和Dkk-1浓度相关系，人多发性骨髓瘤细胞8226和骨肉瘤细胞MG63中可能还存在其他对成骨细胞影响的因子或机制。
骨髓瘤细胞株;骨肉瘤细胞株;上清液;骨细胞增殖
温州医科大学;温州医学院
硕士
血液学
刘新华;俞康
2007
中文
R733.3
40
2009-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）