骨髓瘤细胞Dkk-1mRNA表达及对成骨细胞的影响
[目的]:检测骨髓瘤细胞株8226和骨肉瘤细胞株MG63细胞株培养上清液中Dkk-1的mRNA表达,持续观察两种上清液对成骨细胞增殖和ALP表达水平的影响及拮抗蛋白Dkk-1对成骨细胞的影响和在多发性骨髓瘤中的作用。
[方法]:
1.RT-PCR测定骨髓瘤细胞株8226和骨肉瘤细胞株MG63中Dkk-1mRNA的表达情况。
2.人多发性骨髓瘤细胞株8226和骨肉瘤株MG63置于培养瓶中,MEM完全培养液培养2天后换液,1800rpm离心,上清液用0.22μm微孔滤膜过滤除细胞碎片,置于-70℃低温冰箱保存备用。
3.MG63上清液和Dkk-1抗体加入鼠胚成骨细胞M3T3-El培养体系中,采用CASY,CCK-8,ALP染色,ALP水平检测M3T3-El细胞的变化。
4.8226上清液和Dkk-1抗体加入鼠胚成骨细胞3T3-El培养体系中,采用CASY,CCK-8,ALP染色,ALP水平检测M3T3-El细胞的变化。
[结果]:Rt-PCR检测人多发性骨髓瘤细胞株8226和骨肉瘤株MG63表达Dkk-1,但2种细胞表达程度不同;人多发性骨髓瘤细胞株8226和骨肉瘤株MG63培养上清液能够明显抑制MC3T3E1细胞,抑制程度和上清液浓度呈正相关性,10%,20%,30%MG63上清液加入MC3T3E1细胞培养液中,CASY计数分别为5.2±0.5X106(P<0.01),4.2±0.6X106(P<0.01),3.9±0.7X105(P<0.01),而正常培养液组为6.1±0.8x105;加入DKK-1抗体后能够部分拮抗骨肉瘤株MG63培养上清液对成骨细胞的抑制,CASY计数分别为2.1±0.4X105,2.8±0.7X105(P<0.01);但是不影响人多发性骨髓瘤细胞株8226培养上清液对成骨细胞的抑制,CASY计数分别为2.9±0.9X105,3.0±0.7X105(P>0.05)。
碱性磷酸酶是成骨细胞分化成熟的标志,MC3T3E1细胞处于成骨细胞的早期阶段,碱性磷酸酶表达水平较低,在50ng/ml浓度的BMP-2(骨形成蛋白)诱导作用下,MC3T3E1细胞ALP表达增高,ALP染色强阳性。20%骨肉瘤株MG63和人多发性骨髓瘤细胞株8226培养上清液能够明显抑制MC3T3E1细胞ALP水平,碱性磷酸酶试剂盒检测为4.53±0.4U/100ml(P<0.01),5.85±0.6U/100ml(P<0.01),正常组为7.23±1.0U/100ml;加入DKK-1抗体后能够部分拮抗骨肉瘤株MG63培养上清液对成骨细胞的抑制5.66±0.9U/100ml(P<0.05),但是不影响人多发性骨髓瘤细胞株8226培养上清液对成骨细胞的抑制6.13±1.1U/100ml(P>0.05)。
[结论]:Dkk-1能够抑制成骨细胞MC3T3E1的增殖和ALP活性,抑制程度和Dkk-1浓度相关系,人多发性骨髓瘤细胞8226和骨肉瘤细胞MG63中可能还存在其他对成骨细胞影响的因子或机制。
骨髓瘤细胞株;骨肉瘤细胞株;上清液;骨细胞增殖
温州医科大学;温州医学院
硕士
血液学
刘新华;俞康
2007
中文
R733.3
40
2009-03-31(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)